低氧条件下CapG过表达在肺腺癌发生发展中的作用

作     者：董良良 

作者单位：浙江大学 

学位级别：硕士

导师姓名：应可净

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肺腺癌 低氧 CapG RNA干扰 转移 迁移 

摘      要：背景和目的 肺癌的发病率和病死率居各种恶性肿瘤之首,严重威胁着人类的健康,肺腺癌是肺癌常见的组织学类型,其发病比较隐匿,转移早,病人常常以转移病灶为首发症状。癌细胞转移是造成肺腺癌患者生存率低、预后差的主要原因。目前研究肺腺癌转移的分子机制,提高肺腺癌转移的诊断和治疗无疑具有重要的意义。大量研究显示低氧是大多数实体瘤中一个普遍存在的现象,肺癌亦不例外,它参与调控肿瘤细胞增殖、迁移和黏附等基因的表达,是肿瘤转移的重要促进因素。肿瘤细胞的迁移与细胞运动密切相关,作为一种肌动蛋白结合蛋白,CapG蛋白过表达可导致成纤维细胞和内皮细胞的运动性增强,我们之前的研究表明低氧可显著促进CapG蛋白的表达,其高表达可明显促进肺动脉平滑肌的迁移能力。CapG蛋白在胰腺癌、卵巢癌及口腔鳞状细胞癌等肿瘤中的表达情况亦有报道,尽管结果不一,但皆提示其可能参与到肿瘤的发生发展中。基于以上,本研究拟首先在肺腺癌细胞中探讨低氧与CapG的关系,后观察常氧和低氧条件下靶向封闭CapG后对肺腺癌细胞迁移和增殖的影响,同时探讨CapG蛋白在肺腺癌组织中的表达情况和临床意义,为探索阻断肺腺癌侵袭转移的方法及肺腺癌的治疗提供有价值的资料。 方法 将人肺腺癌细胞株A549和H358各分为常氧组和低氧组,分别置于常氧(37℃,5%CO2,21%O2)和低氧(37℃,5%CO2,1%O2)条件下培养12h、24h、48h后,应用蛋白免疫印迹方法对HIF-1α和CapG蛋白表达水平进行检测;利用脂质体2000介导,将人工化学合成的特异性si-CapG和si-control瞬时转染入A549和H358细胞后,分别在常氧和低氧条件下,采用细胞划痕实验和transwell迁移小室检测细胞迁移能力的变化,,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖能力的变化;将具备完整临床资料的75例肺腺癌的癌组织标本及相应的癌旁组织标本制作成150点组织芯片,应用免疫组化SABC法检测CapG蛋白的表达情况并分析其临床意义。 结果 与相对应的常氧组比较,低氧处理12h后CapG蛋白表达水平无显著差异,24h后其表达水平显著增高,并持续至48h(P0.05),CapG蛋白的高表达与性别显著相关,在男性中多见提示可能与吸烟史相关,且与淋巴结转移呈显著正相关(52.5%vs25.7%,P0.05)。 结论 本研究结果表明低氧(1%02)可显著诱导CapG蛋白的表达,阻断CapG蛋白表达可大大降低肺腺癌细胞的运动迁移能力,在低氧环境中更为显著,而对细胞增殖无显著影响,提示低氧促进肺腺癌细胞的迁移和运动可能是通过调控与诱导CapG的表达,进而影响肌动蛋白细胞骨架来实现的,同时肺腺癌组织中CapG蛋白表达水平明显高于癌旁组,伴有淋巴结转移的肺腺癌标本中,其CapG蛋白表达显著高于无淋巴结转移者,在Ⅲ期和Ⅳ期标本中,CapG蛋白的高表达较Ⅰ期和Ⅱ期标本多,提示CapG在肺腺癌的发生发展中及促进肺腺癌细胞的淋巴结转移方面起着重要作用,有可能作为阻断肺腺癌转移的一个新靶点,也为后续肺癌治疗的研究奠定了基础。