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Tetracycline-inducible protein expression in pancreatic cancer cells: Effects of capg overexpression

World Journal of Gastroenterology 2011年第15期17卷 1947-1960页

作者： Sarah Tonack Sabina Patel Mehdi Jalali Taoufik Nedjadi Rosalind E Jenkins Christopher Goldring John Neoptolemos Eithne Costello Liverpool CR-UK Centre Department of Molecular and Therapeutic Cancer MedicineUniversity of Liverpool Liverpool L69 3GA United Kingdom MRC Centre forDrug Safety Science Department of Pharmacology and Therapeutics School of Biomedical Sciences University of Liverpool L69 3GA United Kingdom National Institute for Health Research Pancreatic Biomedical Research Unit Liverpool L69 3GA United Kingdom

AIM: To establish stable tetracycline-inducible pancreatic cancer cell lines. METHODS: Suit-2, MiaPaca-2, and Panc-1 cells were transfected with a second generation reverse tetracycline-controlled transactivator protein (rtTA2S-M2), under the control of either a cytomegalovirus (CMV) or a chicken β-actin promoter, and the resulting clones were ***: Use of the chicken (β-actin) promoter proved superior for both the production and maintenance of doxycycline-inducible cell lines. The system proved versatile, enabling transient inducible expression of a variety of genes, including GST-P, CYP2E1, S100A6, and the actin capping protein, capg. To determine the physiological utility of this system in pancreatic cancer cells, stable inducible capg expressors were established. Overexpressed capg was localised to the cytoplasm and the nuclear membrane, but was not observed in the nucleus. High capg levels were associated with enhanced motility, but not with changes to the cell cycle, or cellular proliferation. In capg-overexpressing cells, the levels and phosphorylation status of other actin-moduating proteins (Cofilin and Ezrin/Radixin) were not altered. However, preliminary analyses suggest that the levels of other cellular proteins, such as ornithine aminotransferase and enolase, are altered upon capg induction. CONCLUSION: We have generated pancreatic-cancer derived cell lines in which gene expression is fully controllable.

关键词： Pancreatic cancer cells Tetracycline-inducible capg Suit-2 Panc-1 MiaPaCa-2

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胃癌组织中capg蛋白的表达及其与临床病理特征及预后的关系

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临床与实验病理学杂志 2016年第12期32卷 1329-1333页

作者：吕旻桦梁博徐康保邹镇洪南昌大学第二附属医院普外科南昌330006 南昌大学第一附属医院医学科研中心南昌330006 江西省吉安市永丰县人民医院永丰331500

目的检测巨噬细胞加帽蛋白(gelsolin-like actin-capping protein,capg)在胃癌及癌旁组织(距离癌组织边缘>5 cm)中的表达,探讨capg蛋白表达与胃癌临床病理参数及预后的关系。方法收集125例胃癌石蜡包埋组织样本及癌旁组织30例。患者均... 详细信息

目的检测巨噬细胞加帽蛋白(gelsolin-like actin-capping protein,capg)在胃癌及癌旁组织(距离癌组织边缘>5 cm)中的表达,探讨capg蛋白表达与胃癌临床病理参数及预后的关系。方法收集125例胃癌石蜡包埋组织样本及癌旁组织30例。患者均为未行放、化疗的初诊患者。每例组织样本均行capg免疫组化染色,并设置对照组。通过病理医师评分来确定capg蛋白的表达量,探讨capg蛋白表达与胃癌临床病理参数及预后的关系。结果 capg蛋白在细胞质和细胞核中均表达,呈棕黄色颗粒状。癌旁组织中基本无表达,胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织;胃癌组织中capg蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置无显著相关(P均>0.05),与浸润深度(P=0.044)、淋巴结转移(P=0.026)、远处转移(P=0.001)及AJCC分期(P=0.012)显著相关。Kaplan-Meier生存曲线显示,capg蛋白高表达组患者的总体预后较低表达组差,且差异具有显著性(Pcapg蛋白表达情况是胃癌患者预后的独立危险因素。结论 capg蛋白在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的发生、发展有关,可作为胃癌预后判断的指标之一,有望成为胃癌治疗的潜在新靶点。

关键词：胃肿瘤 capg 预后免疫组织化学

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capg与胃癌细胞转移及增殖能力关系的研究

CapG与胃癌细胞转移及增殖能力关系的研究

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作者：吴佳琪浙江大学

学位级别：硕士

背景胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类生命,由于胃癌早期症状无特异性,目前对早期胃癌的诊断率很低,且对胃癌的治疗方式也非常局限,术后的化疗对癌症的预后具有重大意义,因此除了早诊断早治疗之外,寻找化疗的靶点也成为... 详细信息

背景胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类生命,由于胃癌早期症状无特异性,目前对早期胃癌的诊断率很低,且对胃癌的治疗方式也非常局限,术后的化疗对癌症的预后具有重大意义,因此除了早诊断早治疗之外,寻找化疗的靶点也成为重中之重。转移是恶性肿瘤的关键核心问题,约90%恶性肿瘤患者死于转移,对于胃癌,寻找影响其转移的靶点显得尤为重要。capg蛋白是凝胶溶素蛋白超家族(gelsolin superfamily)成员,当Ca2+存在时,capg蛋白作为actin结合蛋白,能够与Ca2+结合,能够在F-actin延伸末端加帽,阻止其延伸,参与肌动纤维重塑,控制细胞凋亡和调节胞吞作用等细胞行为,特别是在细胞的快速增殖、局部浸润和远端转移过程中具有重要作用。已有研究证明在乳腺癌、肺癌、胰腺癌等肿瘤中capg具有促进肿瘤细胞迁移的作用,而其与肿瘤细胞增殖能力的关系还存在争议。基于以上,本研究旨在探究capg蛋白与胃癌细胞转移及增殖能力的关系。方法将人胃癌细胞BGC-823进行免疫荧光实验,进行capg蛋白定位,慢病毒稳转胃癌细胞BGC-823为capg沉默细胞株及空转对照细胞株,Western Blot及PCR验证沉默效果后,经细胞迁移实验及划痕实验验证capg与胃癌细胞迁移速度的关系,经MTT实验及克隆形成实验验证capg与胃癌细胞增殖与集落形成能力的关系。结果细胞免疫荧光定位结果显示capg蛋白在胃癌细胞内广泛分布;细胞划痕及迁移实验显示沉默capg的胃癌细胞迁移能力较对照组下降(Pcapg蛋白在胃癌细胞内广泛分布,沉默capg基因后,胃癌细胞的迁移能力下降,而对胃癌细胞增殖能力及集落形成能力无显著性影响,提示capg蛋白与胃癌细胞的运动迁移能力有关,capg影响肌动蛋白的延伸,进而影响细胞骨架的形成,改变细胞的迁移速度。

关键词：胃癌 capg 转移增殖

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低氧条件下capg过表达在肺腺癌发生发展中的作用

低氧条件下CapG过表达在肺腺癌发生发展中的作用

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作者：董良良浙江大学

学位级别：硕士

背景和目的肺癌的发病率和病死率居各种恶性肿瘤之首,严重威胁着人类的健康,肺腺癌是肺癌常见的组织学类型,其发病比较隐匿,转移早,病人常常以转移病灶为首发症状。癌细胞转移是造成肺腺癌患者生存率低、预后差的主要原因。目前研究肺... 详细信息

背景和目的肺癌的发病率和病死率居各种恶性肿瘤之首,严重威胁着人类的健康,肺腺癌是肺癌常见的组织学类型,其发病比较隐匿,转移早,病人常常以转移病灶为首发症状。癌细胞转移是造成肺腺癌患者生存率低、预后差的主要原因。目前研究肺腺癌转移的分子机制,提高肺腺癌转移的诊断和治疗无疑具有重要的意义。大量研究显示低氧是大多数实体瘤中一个普遍存在的现象,肺癌亦不例外,它参与调控肿瘤细胞增殖、迁移和黏附等基因的表达,是肿瘤转移的重要促进因素。肿瘤细胞的迁移与细胞运动密切相关,作为一种肌动蛋白结合蛋白,capg蛋白过表达可导致成纤维细胞和内皮细胞的运动性增强,我们之前的研究表明低氧可显著促进capg蛋白的表达,其高表达可明显促进肺动脉平滑肌的迁移能力。capg蛋白在胰腺癌、卵巢癌及口腔鳞状细胞癌等肿瘤中的表达情况亦有报道,尽管结果不一,但皆提示其可能参与到肿瘤的发生发展中。基于以上,本研究拟首先在肺腺癌细胞中探讨低氧与capg的关系,后观察常氧和低氧条件下靶向封闭capg后对肺腺癌细胞迁移和增殖的影响,同时探讨capg蛋白在肺腺癌组织中的表达情况和临床意义,为探索阻断肺腺癌侵袭转移的方法及肺腺癌的治疗提供有价值的资料。方法将人肺腺癌细胞株A549和H358各分为常氧组和低氧组,分别置于常氧(37℃,5%CO2,21%O2)和低氧(37℃,5%CO2,1%O2)条件下培养12h、24h、48h后,应用蛋白免疫印迹方法对HIF-1α和capg蛋白表达水平进行检测;利用脂质体2000介导,将人工化学合成的特异性si-capg和si-control瞬时转染入A549和H358细胞后,分别在常氧和低氧条件下,采用细胞划痕实验和transwell迁移小室检测细胞迁移能力的变化,,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖能力的变化;将具备完整临床资料的75例肺腺癌的癌组织标本及相应的癌旁组织标本制作成150点组织芯片,应用免疫组化SABC法检测capg蛋白的表达情况并分析其临床意义。结果与相对应的常氧组比较,低氧处理12h后capg蛋白表达水平无显著差异,24h后其表达水平显著增高,并持续至48h(Pcapg后,细胞划痕和transwell迁移实验均显示常氧和低氧组的细胞迁移能力较随机对照组显著下降,尤以低氧条件下为著(Pcapg蛋白阳性表达率为40%,显著高于癌旁组织的4%(Pcapg蛋白的表达水平与患者的年龄、肺腺癌T分期、临床分期、分化程度均无统计学相关性,但在Ⅲ期和Ⅳ期的癌组织标本中capg的表达水平高于Ⅰ期和Ⅱ期(51.6%vs31.8%,P>0.05),capg蛋白的高表达与性别显著相关,在男性中多见提示可能与吸烟史相关,且与淋巴结转移呈显著正相关(52.5%vs25.7%,Pcapg蛋白的表达,阻断capg蛋白表达可大大降低肺腺癌细胞的运动迁移能力,在低氧环境中更为显著,而对细胞增殖无显著影响,提示低氧促进肺腺癌细胞的迁移和运动可能是通过调控与诱导capg的表达,进而影响肌动蛋白细胞骨架来实现的,同时肺腺癌组织中capg蛋白表达水平明显高于癌旁组,伴有淋巴结转移的肺腺癌标本中,其capg蛋白表达显著高于无淋巴结转移者,在Ⅲ期和Ⅳ期标本中,capg蛋白的高表达较Ⅰ期和Ⅱ期标本多,提示capg在肺腺癌的发生发展中及促进肺腺癌细胞的淋巴结转移方面起着重要作用,有可能作为阻断肺腺癌转移的一个新靶点,也为后续肺癌治疗的研究奠定了基础。

关键词：肺腺癌低氧 capg RNA干扰转移迁移

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探究capg基因与藏猪低氧适应性的潜在关联

探究CapG基因与藏猪低氧适应性的潜在关联

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作者：杨绍康西藏农牧学院

学位级别：硕士

常年生活于高原的藏猪具有很强的抗逆能力以及低氧适应性,对于开展高原适应性方面的研究来说是很好的研究材料。为了探究藏猪低氧适应机制与capg基因的关联性,本研究以长期生活在西藏林芝(平均海拔2900m)的藏猪和大约克猪为研究对象,以... 详细信息

常年生活于高原的藏猪具有很强的抗逆能力以及低氧适应性,对于开展高原适应性方面的研究来说是很好的研究材料。为了探究藏猪低氧适应机制与capg基因的关联性,本研究以长期生活在西藏林芝(平均海拔2900m)的藏猪和大约克猪为研究对象,以两猪种血液生理指标表型数据为出发点,结合capg在DNA水平、m RNA水平、蛋白水平的表达情况,使用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR)、一代测序技术、免疫组织化学(Immuno Histo Chemistry,IHC)、免疫印迹分析(Western blot,WB)以及血液生理指标测定等实验方法,通过对猪capg基因功能的深入挖掘,进一步了解高原动物低氧适应的遗传基础,以期为动物高原生理反应规律和遗传适应分子机制提供依据。1、对藏猪和大约克猪进行血液生理指标测定。结果发现,藏猪的红细胞数量(RBC)、血红蛋白数量(HGB)、红细胞比容(HCT)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)这5项指标的数值均极显著高于大约克猪(P0.05)。2、使用一代测序技术检测进行单核苷酸多态性检测(Single Nucleotide Polymorphism,SNP),挖掘capg基因在藏猪与大约克猪中关键功能位点。通过分析5'侧翼区和CDS区的测序结果,发现capg基因仅在藏猪上发生突变,5'侧翼区共有A-556C、C-489T、T-459C、A-429G、C-274T、A-212G这6个突变位点,CDS区未发现有义突变。经过转录因子预测,发现在C-489T、C-274T、A-212G位点处有转录因子发生改变,且与低氧适应、血氧运输等相关。3、本试验以藏猪与大约克猪作为研究材料,使用RT-q PCR技术检测capg基因在两猪种心脏、肝脏、脾脏、肺脏以及肾脏组织中的表达差异。结果发现,在藏猪与大约克猪中,该基因在各个组织中的m RNA表达量存在极显著差异。capg基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏的mRNA相对表达量均为大约克猪极显著高于藏猪(Pcapg蛋白在藏猪与大约克猪肺脏组织的蛋白表达进行定位。结果发现,capg蛋白在藏猪和大约克猪肺脏组织中广泛表达,主要集中在细胞质与细胞膜;该蛋白在大约克猪肺脏中的表达水平极显著高于藏猪(Pcapg蛋白的表达情况。结果发现capg蛋白在藏猪与大约克猪心脏、肝脏、脾脏中的表达差异不显著(P>0.05),总体表现为大约克猪高于藏猪的趋势;在肺脏组织中,capg蛋白在大约克猪的表达量显著高于藏猪(Pcapg基因是调控藏猪低氧适应的重要候选基因,在调控藏猪高原低氧适应方面起着重要作用。本研究为藏猪的资源保存和利用、高原品种的培育、疫病防治等提供了理论依据,对发展高原畜牧经济有着一定的参考价值。

关键词：藏猪 capg 低氧适应 SNPs WB

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capg在肝细胞癌中的表达及临床意义

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标记免疫分析与临床 2023年第9期30卷 1546-1554页

作者：刘小花杜红飞谢光素张林艳余扬王桂香陈涛成都市新都区人民医院医学检验科四川成都610500 成都医学院第一附属医院检验科四川成都610500

目的利用在线生物信息学数据库,通过组织和细胞水平的实验验证capg基因在肝癌中的表达和临床意义。方法通过分析UALCAN和GEPIA数据库,获得capg基因在肝细胞癌患者中的mRNA转录表达水平、DNA甲基化状态和临床病理特征等;用Kaplan-Meier ... 详细信息

目的利用在线生物信息学数据库,通过组织和细胞水平的实验验证capg基因在肝癌中的表达和临床意义。方法通过分析UALCAN和GEPIA数据库,获得capg基因在肝细胞癌患者中的mRNA转录表达水平、DNA甲基化状态和临床病理特征等;用Kaplan-Meier Plotter绘制肝细胞癌患者的生存曲线,用HPA分析capg的蛋白水平,用Kaplan-Meier Plotter绘制肝细胞癌患者的生存曲线,用HPA分析capg的蛋白水平。用String网站构建相应蛋白的相互作用网络,用LinkedOmics工具对capg共表达的基因进行富集分析;此外,用免疫组化法验证capg在肝癌组织芯片中的表达,用定量PCR法测定capg在肝癌细胞水平的表达。结果肝癌患者肝组织中capg基因的mRNA表达水平和蛋白水平均明显升高(Pcapg的高mRNA表达水平与DNA甲基化状态的降低明显相关。免疫组织学和细胞水平的实验结果证实了capg在肝细胞癌中的明显高表达(Pcapg相互作用的蛋白质参与了生物过程,包括参与肌动蛋白聚合、转录调控、蛋白质运输等生物过程;LinkedOmics富集分析表明,这些共同表达的基因在肝癌组织中可以促进细胞因子代谢过程、T细胞激活、免疫系统的调节、细胞黏附调节以及细胞黏附的蛋白质复合物的合成等。此外,capg mRNA的高表达水平与肝癌患者的总生存期和疾病特异性生存期显著相关(Pcapg基因的高表达与肝癌患者的不良生存期密切相关。capg基因可能是诊断和治疗肝癌患者的潜在靶点。

关键词： capg DNA甲基化肝细胞癌生物信息学

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胃癌组织中capg、Prox-1、TrkB的表达与胃癌淋巴结转移及预后的关系

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临床和实验医学杂志 2022年第5期21卷 494-497页

作者：沈阳汪贯龙毛胜东程元光安徽医科大学第三附属医院胃肠外科安徽合肥230000

目的探究胃癌组织中巨噬细胞加帽蛋白G(capg)、同源盒基因转录因子1(Prox-1)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)的表达与胃癌淋巴结转移及预后的关系。方法回顾性选取2018年1月至2020年12月安徽医科大学第三附属医院收治的100例胃癌患者作为研究对... 详细信息

目的探究胃癌组织中巨噬细胞加帽蛋白G(capg)、同源盒基因转录因子1(Prox-1)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)的表达与胃癌淋巴结转移及预后的关系。方法回顾性选取2018年1月至2020年12月安徽医科大学第三附属医院收治的100例胃癌患者作为研究对象,根据术前有无胃癌淋巴结转移将患者分为转移组(n=45)与未转移组(n=55)。术前对患者胃癌组织中capg、Prox-1、TrkB表达情况予以检测,并对比转移组与未转移组阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线对不同分子标志物表达情况对胃癌淋巴结转移及预后的影响进行分析。结果转移组capg、Prox-1、TrkB阳性表达率分别为84.44%、66.67%、75.56%,均显著高于未转移组(32.73%、12.73%、27.27%),差异均有统计学意义(Pcapg、Prox-1、TrkB联合检测特异度最高,为97.42%,capg联合TrkB敏感度最高,为89.52%;capg、Prox-1、TrkB表达阳性患者生存率明显低于表达阴性患者,差异有统计学意义(Pcapg表达阳性是胃癌患者预后独立影响因素。结论胃癌组织中capg、Prox-1、TrkB阳性表达提示患者存在胃癌淋巴结转移风险,预后差,生存率低,应予以高度重视。

关键词：胃癌 capg Prox-1 TrkB 淋巴结转移预后

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骨架相关蛋白capg在胰腺癌组织中的表达及临床意义

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医药论坛杂志 2011年第10期32卷 1-2,6页

作者：周琳张连峰史成章郑州大学第一附属医院消化科郑州450052

目的探讨骨架相关蛋白capg在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌发生发展的关系。方法采用免疫组化法检测capg在60例胰腺癌患者的癌组织、20例癌旁组织(距癌边缘>5cm)中的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果 capg在胰腺癌组织中... 详细信息

目的探讨骨架相关蛋白capg在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌发生发展的关系。方法采用免疫组化法检测capg在60例胰腺癌患者的癌组织、20例癌旁组织(距癌边缘>5cm)中的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果 capg在胰腺癌组织中的表达阳性率为68.3%(41/60),显著高于癌旁组织[30.0%(6/20),Pcapg表达与胰腺癌的淋巴结转移及TNM分期密切相关(P0.05)。结论 capg可能通过促进胰腺癌细胞的运动侵袭能力,参与胰腺癌的转移发生。

关键词：胰腺肿瘤转移 capg

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靶向封闭capg基因对胰腺癌细胞运动侵袭能力的影响

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中国实用医刊 2011年第14期38卷 1-3页

作者：周琳张连峰李伟芳史成章郑州大学第一附属医院消化科 450052

目的观察靶向封闭capg基因对胰腺癌细胞株BxPC3运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向capg的小干扰RNA，将其转染到BxPC3细胞中，蛋白质印迹法检测转染前后细胞中capg蛋白的表达，采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力... 详细信息

目的观察靶向封闭capg基因对胰腺癌细胞株BxPC3运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向capg的小干扰RNA，将其转染到BxPC3细胞中，蛋白质印迹法检测转染前后细胞中capg蛋白的表达，采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果capgsiRNA能有效降低BxPC3细胞中capg的表达，capg在蛋白质水平的表达抑制率达80％左右。抑制BxPC3细胞中capg的表达后，BxPC3细胞的运动侵袭能力明显下降，穿过人工基底膜的细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论封闭capg表达能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在体外的运动侵袭能力。

关键词：胰腺肿瘤 capg 小干扰RNA 细胞骨架肿瘤转移

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肾癌组织中Mina53和capg表达及临床意义

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局解手术学杂志 2012年第4期21卷 381-383页

作者：赵致广杨增悦邱建新张伟赵娜第四军医大学附属唐都医院泌尿外科陕西西安710038

目的探讨Mina53(Myc-induced nuclear antigen 53)和capg(capping protein)在肾细胞癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组化SP法测定66例经HE染色病理确诊肾细胞癌(RCC)组织和30例癌旁组织中Mina53和capg的表达,并分析其与病理分级及... 详细信息

目的探讨Mina53(Myc-induced nuclear antigen 53)和capg(capping protein)在肾细胞癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组化SP法测定66例经HE染色病理确诊肾细胞癌(RCC)组织和30例癌旁组织中Mina53和capg的表达,并分析其与病理分级及临床分期之间的关系。结果与RCC旁组织比较,RCC中Mina53和capg阳性表达明显升高。Mina53和capg在RCC组织不同的病理分级中,G3和G2明显高于G1表达;在TNM分期中,Mina53和capg在T3、T4中的表达明显高于T1、T2。Mina53和capg的表达与远处转移和复发有一定关系,且两者表达呈显著相关性(Pcapg在RCC组织中的表达与临床病理分级、TNM分期、复发和转移有关,这对临床治疗和预后判断有一定的参考意义。

关键词：肾细胞癌 Mina53 capg 基因表达免疫组织化学

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