蜂胶中黄酮的提取及应用研究

作     者：盛文胜 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张彬;严德忠

授予年度：2007年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：蜂胶 黄酮 提取 分离 人参 

摘      要：本论文主要对蜂胶中黄酮的提取、测定、分离、产品的开发应用以及产品的毒性、功能性进行了研究，主要实验结果如下： 采用超声波法提取蜂胶中的黄酮，通过实验得到了超声波提取的最佳工艺条件：乙醇浓度95％、温度35℃、固液比1：10、提取时间20min。采用超临界CO萃取蜂胶中有效成分，以萃取率为指标，得到了蜂胶有效成分萃取的最佳条件为萃取压力30Mpa，萃取温度55℃，CO流量50kg／h，萃取时间4小时，萃取率最高达到37.50％。乙醇提取蜂胶中黄酮的最佳工艺为：乙醇浓度95％、固液比1：8、提取时间24小时、提取温度25℃，采用160—200目磷酸型活性炭在60℃下搅拌1h脱铅，采用-18℃冷冻8h后过滤除蜡，得到的蜂胶提取物铅含量在0.4ppm以下，蜂蜡含量在0.2％以下。 采用三种分光光度比色法和HPLC法对乙醇提取物和超临界CO萃取物中的黄酮进行比较测定，得到415nm比色法的结果为5341mg/100g—8080mg/100g和1990mg/100g—2316mg／100g在四种方法中测得的结果最低，不符合测定要求，360nm比色法高于HPLC法较为合理。510nm比色法测定的乙醇浸泡提取物中黄酮的结果最高为41388mg/100g—45998mg/100g，但是超临界CO萃取物中的黄酮为6752—7667mg/100g。考虑到保健食品的竞争性最终确定510nm比色法为测定蜂胶产品黄酮含量的方法。通过对蜂胶乙醇提取物和超临界CO萃取物的GC-MS黄酮成分统计分析得出总共测出11种黄酮，蜂胶乙醇提取物中含有9种，相对含量为39.73％，超临界CO萃取物中6种，相对含量为25.32％，其中4种为两者共有。 采用较低浓度酒精溶液分离蜂胶中较强极性的黄酮类物质的小试得率为22.5％，中试得率在20％以上，该方法能够富集部分黄酮，为开发高黄酮含量的蜂胶保健食品提供了原料。采用冷冻、结晶、过滤、溶解、重结晶的方法处理蜂胶乙醇提取物，能够分离得到较高含量的黄酮类化合物，经过红外光谱和液相色谱定性、定量分析得出此类化合物中的柯因纯度较高。公司在生产过程中常常发现蜂胶软胶囊内容物或蜂胶液产品中有黄色的沙状物质，通过该分离和鉴定方法，可以确定该黄色的沙状物质的成分。 采用蜂胶分离物进行了蜂胶新产品的开发，通过实验得到人参蜂胶液的最佳配方为7.5％蜂胶乙醇提取物，4％的人参提取物，30％PEG400，58.5％的75％的食用酒精;高含量蜂胶软胶囊的最佳配方为：蜂胶乙醇提取物30％，PEG40050.5％，甘油14.5％，纯化水5％;油溶蜂胶软胶囊的最佳配方为蜂胶乙醇提取物20％，大豆油61％，蜂蜡6.5％，卵磷脂2.5％，淀粉10％。并且采用此配方进行中试，对中试的三批样品置于38℃和相对湿度75％的环境中连续观察三个月，其功效成分和卫生学等指标均符合稳定要求。 人参蜂胶液急性毒理试验LD均大于20ml／kgBW，属无毒级。三项遗传毒性试验的Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果均为阴性。30天喂养试验结果所检指标均在正常值范围内。 人参蜂胶液功能实验：小鼠细胞免疫功能实验的脾淋巴细胞转化实验呈阳性结果;迟发型变态反应实验呈阳性结果。小鼠细胞免疫功能实验抗体生成细胞实验呈阳性结果;小鼠半数溶血值测定结果呈阳性。小鼠单核-巨噬细胞功能实验呈阳性结果;小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验呈阳性结果。NK细胞活性测定结果呈阳性。由以上结果判定样品具有增强免疫力的功能。