厄洛替尼通过调控miR-9上调FoxO1抑制非小细胞肺癌细胞生长的作用机制

作     者：谌茜 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王雪融

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：miR-9 FoxO1 厄洛替尼 非小细胞肺癌 

摘      要：靶向表皮生长因子受体(EGFR)的小分子抑制剂应用于非小细胞肺癌的治疗有着突破性的意义。微小RNA (miRNA)属于内源性小分子非编码RNA,能通过与靶基因mRNA的3’UTR的结合而负性调控靶基因的表达。miRNA在肿瘤的发生、发展和转移中发挥重要的作用。但是,EGFR抑制剂对miRNA的调控作用和机制仍不明确。本研究中,我们首先在多个NSCLC细胞株上检测到厄洛替尼下调了miR-9的表达。然后,在人非小细胞肺癌组织样本中检测到肿瘤组织与癌旁正常组织相比,miR-9表达增高。外源性过表达miR-9能够促进NSCLC细胞的生长,阻抑miR-9的表达可抑制细胞的生长。并且上调miR-9的表达能够减弱厄洛替尼抑制细胞生长的作用。接下来,我们发现miR-9能下调Fox01的表达。使用腺病毒过表达FoxO1可抑制细胞的生长,用siRNA阻抑Fox01的表达可促进细胞的生长。外源性过表达Fox01能够部分逆转miR-9促细胞生长的作用。进一步研究发现,厄洛替尼能上调Fox01的蛋白表达,具有时间和剂量依赖性。过表达miR-9能部分抑制厄洛替尼对Fox01的上调作用,而且过表达Fox01能增强厄洛替尼对细胞生长的抑制作用。最后,我们发现厄洛替尼引起的miR-9表达减少主要与下调与miR-9-1有关。甲基转移酶抑制剂5-Azacytidine可部分恢复厄洛替尼下调miR-9和miR-9-1的作用,提示厄洛替尼可能是通过促进miR-9-1的DNA甲基化而下调了miR-9的表达。上述结果说明,厄洛替尼通过促进miR-9-1的DNA甲基化而下调miR-9的表达,进而上调其靶基因Fox01的表达,这可能是厄洛替尼抑制NSCLC细胞生长的重要机制之一。我们的研究从miRNA的新角度,阐释了厄洛替尼的作用机制,也为靶向miRNA增强EGFR抑制剂的抗肿瘤作用提供了新思路。