ASPN在正常和发育性髋脱位髋臼软骨中差异表达的研究

作     者：王李利 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李祁伟

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：发育性髋脱位 髋臼软骨 ASPN iTRAQ 儿童 

摘      要：目的:发育性髋脱位(developmental dysplasia of the hip,DDH)的发病机制众多,目前难以明确,既往研究及观察证实髋臼形态改变与其密切相关。该研究通过比较正常幼儿与DDH患儿髋臼软骨组织中asporin(ASPN)在mRNA和蛋白水平上的表达差异,探索引起发育性髋脱位髋臼软骨形态改变的原因。研究方法:收集2013年05月至2016年11月在中国医科大学附属盛京医院小儿骨科住院的发育性髋脱位患者,行髋关节切开复位治疗时清除的少许髋臼窝边缘软骨组织作为研究对象(共计26例,30髋,其中男性3例,女性23例,年龄6月至6岁,平均2.42±1.51岁)。收集恶性肿瘤截肢的儿童、引产胎儿以及因其它疾病死亡的非骨关节畸形新生儿的髋臼软骨组织作为正常对照(共计10例,15髋,其中男性4例,女性6例,年龄0天至5岁,平均0.33±1.25岁)。上述标本组织均于液氮或-80℃条件下保存,应用iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation,同位素标记相对与绝对定量)和Western-blot实验方法检测ASPN蛋白质表达水平,以及应用RT-PCR技术检测其mRNA表达水平。采用SPSS软件(21.0版本,美国)对数据进行统计学分析,数据资料均采用均数±标准差(x±s)方式表示,采用两样本的t检验方法进行组间比较分析,采用多元线性回归方法评估变量之间的相关性,P0.05视为统计学差异显著。结果:1.iTRAQ实验结果:ASPN表达量在髋脱位组较正常组出现上调(1.10±0.04(髋脱位组)vs.0.93±0.03(正常组),P0.05),统计学差异显著。2.RT-PCR实验结果:ASPN在髋脱位组髋臼软骨组织中mRNA水平上的表达量较正常组出现上调(2.69±0.52(髋脱位组)vs.1.00±0.44(正常组),p0.05),统计学差异显著。3.Western-blot实验结果:ASPN表达量在髋脱位组较正常组出现上调(0.89±0.23(髋脱位组)vs.0.47±0.19(正常组),p0.05),统计学差异显著。4.相关性分析结果:ASPN基因的表达与年龄和性别无明显相关性(P=0.44,P=0.06),ASPN蛋白的表达与年龄和性别无明显相关性(P=0.58,P=0.23)。结论:ASPN表达量在发育性髋脱位髋臼软骨组织中出现上调,ASPN表达上调可能与DDH髋臼形态发育异常有关,即ASPN的异常表达可能是DDH致病因素之一。