蓝藻抗病毒蛋白CVN及衍生物抗甲型流感体内外活性的研究

作     者：吴崇超 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：熊盛

授予年度：2013年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：蓝藻抗病毒蛋白N 甲型流感病毒 聚乙二醇修饰 连接肽 血凝素 鸡胚 小鼠 

摘      要：甲型流感严重影响着人类的生活生产，每年可引起几十万人死亡。目前，临床使用的抗流感专一性药物匮乏，并且病毒表面抗原极易漂变和转变，容易引起病毒的耐药性，因此对抗流感病毒新药的研发迫在眉睫。 蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)是1997年发现的具有抑制多种包膜病毒活性的蛋白质，对甲型流感的抑制作用也不例外。但是CVN作为原核来源的小分子蛋白质，具有许多成药性的缺陷，为此本课题组最先在E. coli中高效可溶表达CVN的衍生物LCVN和PEG-LCVN，希望可以获得毒性低，活性好，免疫原性小的潜在抗病毒药物。因此制备后的CVN及衍生物的生物活性评价非常关键，既是对前期工作的反馈也是对后期药物开发的指导。 本文从多个水平上评价CVN及衍生物的抗流感活性。分子水平上ELISA和血凝抑制实验同时说明CVN及衍生物可作用于不同病毒株表面糖蛋白HA，并且具有浓度依赖性。在细胞水平上，MTT法测定CVN，LCVN和PEG-LCVN的细胞毒性依次降低。在抗病毒活性方面三种药物均可抑制不同毒株的增殖，其中PEG-LCVN抗病毒的选择性指数最高。不同时间加药法说明CVN及其衍生物对病毒有直接灭活作用，干扰病毒的吸附，主要作用于病毒感染早期。鸡胚半体内和小鼠体内抗病毒实验结果表明，CVN及衍生物在活体内也有抑制病毒的活性，延长死亡时间，增加死亡保护率，减弱肺组织病变，降低肺指数和肺内病毒滴度。CVN及衍生物在体内外具有良好的抗病毒作用，可作为抗流感病毒潜在药物深入开发。