3α-HSD基因的克隆和表达
作者单位：吉林大学
学位级别：硕士
导师姓名：郑永晨
授予年度：2007年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学]
摘 要：3α-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase, 3α-HSD)是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶,临床上用3α-HSD作为工具酶来测定人血清中的总胆汁酸(TBA)浓度。 本实验首先从睾酮丛毛单胞菌中得到DNA,经PCR获得大量3α-HSD DNA,将目的基因插入原核表达载体pET28a(+)的启动子下游,构建了原核表达质粒pET28a(+)-3α-HSD。重组质粒pET28a(+)-3α-HSD用氯化钙法转化入宿主菌BL21(DE3)中,筛选出含重组质粒的基因工程菌。工程菌经IPTG诱导表达和酶活性测定,证明原核重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了目的蛋白,经IPTG诱导后,其菌的裂解液具有3α-羟类固醇脱氢酶的活性。
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