曲古抑菌素A对甲状腺癌PKB/CDC25B信号通路的调控作用

作     者：闫纪亮 

作者单位：辽宁医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：肖建英

授予年度：2011年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：曲古抑菌素A 甲状腺鳞癌 PKB CDC25B MPF 

摘      要：目的 本研究旨在观察TSA对甲状腺鳞癌SW579细胞株PKB、CDC25B和MPF蛋白表达及活性的影响,探讨TSA是否通过PKB/CDC25B信号通路调节MPF的活性进而影响细胞生长增殖,分析TSA抗甲状腺癌的作用机制。 方法 体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和TSA组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期;ELISA方法检测MPF活性;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态。 结果 TSA可明显抑制SW579细胞的增殖,经TSA作用24h之后,细胞体积变小且较规则,核浓缩,胞质增多,核分裂相减少。流式细胞结果显示,Wortmannin抑制剂组和TSA处理组G1期细胞明显增多,G2期相应减少,S期无显著变化;应用酶联免疫吸附法检测MPF结果显示,Wortmannin组MPF活性显著低于对照组,TSA组MPF活性也显著下调。Western blot检测结果显示,与对照组相比,Wortmannin组可显著降低PKB和CDC25B蛋白表达水平,同时PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平也显著下调,而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调;TSA组PKB和CDC25B蛋白表达水平也相应下调,PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调,CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调。 结论 1、在甲状腺鳞癌SW579细胞中确实存在PKB/CDC25B信号通路。 2、TSA可能通过PKB/CDC25B信号通路下调MPF的活性,进而抑制甲状腺鳞癌细胞增殖。