ERα特异性抑制剂TPSF对小鼠植入前胚体外发育及转录因子SOX2、OCT4和TRPS1表达的影响

作     者：宋婵婵 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王世鄂

授予年度：2016年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

主      题：雌激素受体α TPSF 合子基因组激活 转录因子 

摘      要：目的:观察ERα特异性抑制剂TPSF对小鼠植入前胚体外发育的影响;研究TPSF对小鼠2-细胞胚内总ERα(pan ERα)与p-ERα-ser118,以及转录相关因子Rpb1、Sox2、Oct4和Trps1表达的影响;为进一步阐明ERα在小鼠植入前胚发育的作用机制提供理论依据。方法:1.收集KM雌性小鼠与雄性小鼠(♀KM×♂KM)交配所得1-细胞胚,分别置于KSOM培养液、含1/3000(体积比)DMSO的KSOM培养液,以及添加不同浓度TPSF的KSOM培养液中进行体外培养,并观察小鼠植入前胚体外发育情况;2.收集体外发育至2-细胞胚(h CG后45h)的植入前胚,利用Realtime-PCR检测KSOM组和TPSF(5μM和7.5μM)组中ERαm RNA的表达水平;并利用免疫荧光染色结合激光共聚焦扫描显微镜检测pan ERα和p-ERα-ser118蛋白的定位和表达情况;3.收集体外发育至2-细胞胚(h CG后45h)的植入前胚,利用Realtime-PCR检测KSOM组和TPSF(5μM和7.5μM)组中Sox2、Oct4和Trps1三种基因m RNA的表达水平;并利用免疫荧光染色结合激光共聚焦扫描显微镜检测p-RPB1、SOX2、OCT4和TRPS1四种蛋白的定位和表达情况。结果:***α特异性抑制剂TPSF对小鼠1-细胞胚的体外发育具有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性。TPSF(5μM)抑制1-细胞胚发育至4-细胞胚(P0.05);免疫荧光染色检测结果显示,与KSOM组对比,TPSF(5μM和7.5μM)组pan ERα蛋白表达明显上调(P0.05);免疫荧光染色检测结果显示,与KSOM组对比,TPSF(5μM和7.5μM)组p-RPB1、SOX2和TRPS1三种蛋白的表达水平明显下调(P0.05)。结论:***α特异性抑制剂TPSF对KM小鼠1-细胞胚的体外发育具有显著的抑制作用,且呈浓度依赖性,一定浓度的TPSF(7.5μM)使2-细胞胚内pan-ERα蛋白表达明显上调,m RNA表达无明显变化;而细胞核内p-ERα-ser118蛋白表达明显下调,提示ERα对小鼠植入前胚体外发育有一定的作用,且TPSF可能主要通过抑制ERα的丝氨酸118位点的磷酸化来发挥其抑制作用;***α特异性抑制剂TPSF可使KM小鼠体外发育2-细胞胚内p-RPB1、SOX2、TRPS1等3种转录相关因子的表达明显下调,提示TPSF可能通过影响小鼠植入前胚的转录活动来发挥其抑制功能,从而影响小鼠植入前胚的体外发育。