深部真菌感染快速诊断方法的研究

作     者：徐秀莲 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴延芳;陈官芝

授予年度：2002年

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：真菌 聚合酶链反应 大亚基核糖体 rRNA基因 深部真菌感染 

摘      要：目的 建立两步法聚合酶链反应(two-step PCR)快速检测和鉴定临床标本中深部真菌的方法。 方法 在编码真菌大亚基rRNA基因的保守区设计1对通用引物，根据通用引物扩增区的可变区设计临床常见的3种深部真菌即白念珠菌、新生隐球菌及烟曲霉菌的特异性引物，建立检测不同种属真菌大亚基rRNA基因的两步法PCR，对95份取自可疑深部真菌感染患者的临床标本进行检测和鉴定并与常规真菌分离培养结果比较，同时检测反应体系的敏感性和特异性。 结果 ①通用引物可扩增6属12种14株真菌标准菌株和临床分离菌株，其扩增产物为一大小在550bp～650bp范围内的DNA片段。白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉菌的特异性引物仅能扩增其相应菌株，扩增片段分别为156bp，183bp和192bp;而临床常见细菌、病毒及人白细胞DNA经相同方法扩增后均未见特异性条带。②通用引物PCR检测模拟白念珠菌感染血标本、新生隐球菌感染脑脊液标本和烟曲霉菌感染支气管肺泡灌洗液(BAL)标本中真菌的敏感度分别为10CFU／ml、10CVU／ml和15CFU／ml。③95份临床标本，通用引物PCR检测29份标本阳性，常规真菌分离培养18份阳性，通用引物PCR的检出率高于分离培养，差异有显著性(x=9.091，P〈0.05)。④两步法PCR对95份 深邯真闲感染快邀诊断方法的研究 临床标本中白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉菌的检出率显著高于分离培 养的检出率(X‘＝4．178 P0．05)，2走方法对 3禾病原性真菌菌种的 鉴定结果一致。 结论 两步法PCR检测临床深部真菌感染敏感、特异、且简便快 速，适合在临床推广应用。