紫甘薯花青素对酒精性肝损伤和对肝癌的影响及其机制的研究

作     者：李泓烨 

作者单位：西南交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：喻凯

授予年度：2015年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：活性氧 紫甘薯花青素 酒精性肝损伤 人肝癌细胞SNU-387 凋亡 抗炎 

摘      要：目的：通过前期对亚油酸、鸵鸟油、亚油酸甲酯、鸸鹋油和紫甘薯花青素进行抗炎活性的筛选,确定以紫甘薯花青素为主要研究对象,探讨紫甘薯花青素对慢、急性酒精性肝损伤,以及体外培养的人肝癌细胞SNU-387的影响及其可能的机制。方法：利用乙醇制备小鼠慢、急性酒精性肝损伤模型,用不同终浓度紫甘薯花青素灌胃给药,通过体征观察,脏器指数测定,AST、ALT、ADH和GRAC等生化指标的检测以及肝脏组织HE染色病理切片的分析,观察紫甘薯花青素对酒精肝损伤的防治功能。在不同终浓度紫甘薯花青素处理下,利用MTT法和Hoechst 33258染色法,对人肝癌细胞SNU-387活力进行测定,状态进行观测;通过测定细胞TNF-α含量来考察死亡受体TNFR1介导的外源性凋亡通路的作用;应用信号通路阻断剂PDTC和SB203580,通过测定细胞内Caspase-8表达量变化来考察NF-κB和MAPK信号通路的作用。在不同终浓度紫甘薯花青素处理下,利用H2DCFDA染色法,通过倒置相差显微镜和生化多功能酶标仪对人肝癌细胞SNU-387内活性氧的含量进行测定;同时,对细胞内SOD的活力进行测定;应用活性氧猝灭剂N-乙酰半胱氨酸和信号通路阻断剂,通过测定细胞内Caspase-8表达量变化来考察活性氧对信号通路的影响。结果：在慢性酒精性肝损伤实验中,模型组血清AST、ALT活力及肝脏、脾脏指数升高,肝匀浆ADH含量及肾脏指数降低;与模型组比较,紫甘薯花青素剂量组血清AST、ALT活性及肝、脾指数降低,ADH含量及肾脏指数增加;肝脏组织HE染色病理切片显示紫甘薯花青素剂量组细胞肿胀消退,结构恢复完整;同时,对核黄素的含量水平基本不产生影响。在急性酒精性肝损伤实验中,模型组血清中的AST、ALT活力升高,肝脏匀浆中ADH含量水平降低;与模型组比较,紫甘薯花青素剂量组血清AST、ALT活性降低,肝脏匀浆中ADH含量水平增加,幅度相比于慢性酒精性肝损伤时低。在细胞凋亡实验中,结果表明,不同终浓度紫甘薯花青素作用下,人肝癌细胞SNU-387活力降低,出现核固缩等凋亡特征,细胞内TNF-α含量和Caspase-8表达量提高;在阻断剂PDTC作用下,Caspase-8表达量无差异;在阻断剂SB203580作用下,Caspase-8表达量下降。在活性氧实验中,结果表明,不同终浓度紫甘薯花青素作用下,人肝癌细胞SNU-387内活性氧含量升高,SOD活性降低;应用活性氧猝灭剂N-乙酰半胱氨酸,Caspase-8表达量降低;在阻断剂PDTC作用下,Caspase-8表达量无差异;在阻断剂SB203580作用下,Caspase-8表达量下降。结论：紫甘薯花青素可以降低小鼠血清中AST、ALT活力,提高肝脏匀浆中ADH含量,细胞肿胀消退,维持细胞结构,核黄素营养状况不受影响;在酒精戒断下的防治效果优于持续饮酒下的防治效果;可以通过死亡受体TNFR1介导的外源性凋亡通路和MAPK信号通路参与介导肝癌细胞SNU-387的凋亡过程;可以通过抑制肝癌细胞SNU-387中SOD的活力来提高活性氧含量;活性氧可能在一定程度上激活NF-κB通路,并可通过激活MAPK通路参与介导肝癌细胞SNU-387凋亡进程,增进细胞的凋亡。