喜树碱结构类似物FL118对人卵巢癌的抑制作用及机制研究

作     者：赵洪芹 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜国辉;刘佳

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：FL118 卵巢癌 胞红蛋白 增殖 迁移 

摘      要：目的:FL118是一种新型喜树碱结构类似物。前期研究发现,FL118能明显拮抗结肠癌、头颈癌及非小细胞肺癌等恶性肿瘤的进展和复发。差异蛋白组学分析技术检测FL118(0/100 nM)处理结肠癌细胞系HCT-116 72 h后,发现FL118能明显升高肿瘤抑制蛋白胞红蛋白(CYGB)的表达水平。但是FL118对卵巢癌的作用及相关机制尚不明确。该项目旨在在体内、外考察FL118对卵巢癌的抗肿瘤活性,并靶向CYGB进一步探讨FL118抗卵巢癌增殖和迁移作用的分子机制。方法:细胞水平,选人卵巢癌细胞系ES-2和SK-O-V,首先采用MTT法和划痕实验检测FL118对卵巢癌细胞系增殖和迁移能力的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹杂交(Western Blot)技术检测FL118(0/10/100 nM)处理48 h,对卵巢癌细胞中CYGB在mRNA和蛋白表达水平的影响;采用si-RNA干扰方法下调CYGB表达后转染卵巢癌细胞,FL118(100 nM)处理48/24 h后,MTT法和划痕实验再次检测CYGB下调后,FL118对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。动物水平,皮下接种卵巢癌ES-2细胞建立裸鼠异种移植瘤模型,待瘤块体积长到100-200mm时,随机分为4组:溶剂对照组,FL118组(5 mg/kg),FL118组(10 mg/kg),拓扑替康组(2 mg/kg)。采用灌胃的方式给予FL118(5mg/kg、10 mg/kg),每周给药1次,连续给药20天,期间每隔1天记录裸鼠的体重和肿瘤的体积。当肿瘤体积大于1500mm或者濒临死亡时,处死裸鼠取瘤块,称量瘤块的重量以及检测不同组别瘤块中CYGB mRNA和蛋白水平的表达量。结果:细胞水平,FL118能明显抑制卵巢癌细胞ES-2和SK-O-V的增殖(p0.05)。然而,FL118处理(10 mg/kg)组与溶剂对照组相比,体重下降,并且差异有统计学意义(p0.05)。最后,FL118处理组CYGB表达量在m RNA和蛋白水平均上调。结论:细胞水平,FL118能够显著抑制卵巢癌ES-2和SK-O-V细胞的增殖和迁移能力;FL118通过上调CYGB的表达抑制卵巢癌ES-2和SK-O-V细胞的增殖和迁移能力。动物水平,FL118能够显著抑制肿瘤细胞的生长,并且比拓扑替康抑制肿瘤生长的效应更好;但是,在FL118浓度达到10 mg/kg以后,可能由于剂量相对较高的原因,裸鼠的体重比FL118(5mg/kg)组以及空白对照组明显下降,这提示我们10 mg/kg可能对裸鼠有一定的毒性;此外,体内实验也表明FL118能上调CYGB的表达。本研究为FL118的抗肿瘤机制和其进一步的临床应用提供了新的理论基础。