GAS41在神经胶质瘤中的表达及其RNA干扰慢病毒载体的构建

作     者：杨俊梅 

作者单位：湖南师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王光伟

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：神经胶质瘤 GAS41 慢病毒载体 RNA干扰 

摘      要：目的：检测胶质瘤扩增序列41(Glioma-amplified sequence41, GAS41)基因在不同病理级别的神经胶质瘤组织及神经胶质瘤细胞系中的表达,探讨GAS41基因在神经胶质瘤发展中的作用。 方法：(1)采用免疫组织化学染色法、Western blot从蛋白水平检测30例不同病理级别的神经胶质瘤组织中GAS41的表达情况。 (2)通过Western blot检测神经胶质瘤细胞系中GAS41的表达情况,并通过分子克隆技术构建GAS41基因的RNA干扰慢病毒载体GV118-GAS41-RNAi,连同包装质粒pHelper1.0和包膜质粒pHelper2.0共同转染293T包装细胞,收集储存可表达GAS41特异性干扰慢病毒载体的病毒颗粒并进行滴度测定。 结果：(1)GAS41蛋白在高级别神经胶质瘤组织中的表达强于低级别神经胶质瘤组织,且差异有统计学意义(P=0.0110.05)。 (2)GAS41在神经胶质瘤细胞系A172中表达较高,构建的GAS41干扰慢病毒载体GV118-GAS41-RNAi经PCR鉴定和测序,结果与设计序列完全相符,慢病毒重组载体构建成功,将GV118-GAS41-RNAi、 pHelper1.0和pHelper2.0三质粒共同转染293T包装细胞后,收获病毒并测定病毒滴度为5×108TU/ml。 结论：(1) GAS41在神经胶质瘤中的表达水平随着肿瘤恶性程度的增高而增强,提示GAS41的表达量也许可以作为高级别神经胶质瘤的一个判断标准。 (2)成功构建了GAS41干扰慢病毒载体GV118-GAS41-RNAi,神经胶质瘤细胞系A172可用于后续进一步研究干扰GAS41基因的表达对神经胶质瘤细胞生物学活性的影响,为后续实验奠定了基础。