松江鲈（Trachidermus fasciatus）几丁质酶基因的克隆、表达和功能分析

作     者：满馨 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：祝茜

授予年度：2018年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

主      题：松江鲈 几丁质酶 Tf-Ch1 原核表达 抗真菌作用 

摘      要：松江鲈(Trachider fasciatus)是一种降海洄游性鱼类,为国家II级保护动物,具有较高的生态价值和经济价值。人工养殖是恢复其自然种群的有效手段,而养殖过程中必然需要解决其病害问题,比如致病真菌感染。几丁质酶(Chitinase)是一类水解几丁质的酶,广泛存在于动物、植物、微生物体内,具有多种生理功能,尤其是在抗真菌方面发挥着重要的作用。为了深入了解松江鲈的几丁质酶,本实验通过RACE技术克隆获得了松江鲈一个几丁质酶基因的cDNA全长,命为Tf-Ch1,并对其进行了生物信息学分析;构建其原核表达载体,获得重组蛋白,并对重组几丁质酶的活性和功能进行检测。Tf-Ch1的cDNA序列全长为1833 bp,开放阅读框(ORF)为1362 bp,编码453个氨基酸。Tf-Ch1包含一个信号肽和两个结构域,分别是N端的Glyco8结构域,C端的CBM4结构域。系统发育树结果表明所有的鱼类几丁质酶聚为一大支,其他脊椎动物的几丁质酶聚为一大支,Tf-Ch1与鲈形目的大黄鱼(Larimichthys crocea)的几丁质酶关系最近。体外抑菌实验表明,Tf-Ch1重组蛋白可以抑制黑曲霉(Aspergilluswiger)等真菌的生长。Tf-Ch1的糖结合结构域可以和几丁质等多糖结合,对酵母菌具有凝集作用,并且对于提高整个几丁质酶的酶活性具有重要意义。综合以上结果,我们推测Tf-Ch1对于松江鲈防御真菌的侵害具有一定作用。