TRIM24和P27对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系生物学行为的影响

作     者：郭亚平 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李曼

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：TRIM24 P27 三阴性乳腺癌 生物学行为 

摘      要：研究背景:乳腺癌是女性最常见的肿瘤,居世界女性恶性肿瘤发病率的第一位,严重影响着女性的健康。三阴性乳腺癌(triple negative breast carcinoma,TNBC)是指雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)及人类表皮生长因子受体2(human epithelial growthfactor receptor2,HER2)均为阴性的乳腺癌,是一种比较特殊的乳腺癌亚型,占乳腺癌的15%0%左右,且多见于年轻女性。TNBC因受体表达均为阴性,故对内分泌治疗及靶向治疗不敏感,化疗成为主要的治疗方法,但很快出现化疗抵抗,因此,研究乳腺癌分化增殖及复发转移的分子机制,对乳腺癌的诊治及预后评估具有重要意义。三重基序蛋白24(tripartite motif 24,TRIM24)又被称为转录调节因子1α,在调控细胞生长增殖及恶性肿瘤形成等过程中发挥着重要作用。既往已有研究表明TRIM24在三阴性乳腺癌细胞系中存在过表达,但具体机制尚不明确。P27基因是调节控制细胞周期的重要基因,其机制主要是可与细胞周期蛋白结合,抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)的活性。P27在三阴性乳腺癌细胞系中存在低表达,且其低表达与较差的临床预后相关。已有研究证实在肺癌细胞系中TRIM24与P27相关,但在乳腺癌中未见相关报道。研究目的:明确TRIM24对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的细胞生长增殖、侵袭迁移、细胞凋亡等多种生物学行为的影响,并进一步探讨TRIM24和P27在三阴性乳腺癌中的相互作用,以便为三阴性乳腺癌的治疗提供新思路及线索。研究方法:(1)应用siRNA瞬时转染技术,将siTRIM24、siP27及siNegative control(阴性对照)分别转染至三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,从而干扰TRIM24、P27基因的表达。(2)分别采用RT-PCR技术及Western Blot技术检测各转染组中TRIM24及P27基因在mRNA水平及蛋白水平的表达情况。(3)应用划痕实验检测TRIM24及P27基因分别沉默及联合沉默后,乳腺癌细胞的迁移情况。(4)通过流式细胞仪对各转染组进行细胞凋亡检测。(5)应用MTT方法分别检测siTRIM24和(或)siP27转染组、siNC组中乳腺癌细胞系的细胞增殖情况。研究结果:***-PCR结果显示:在乳腺癌细胞系中,与siNC组比较,在mRNA的表达水平上,沉默P27基因后,P27的表达下调,而TRIM24的表达上调。沉默TRIM24基因后,TRIM24的表达下调,而P27的表达反之上调。*** Blot结果提示:在乳腺癌细胞中,与siNC组比较,干扰P27基因后,可引起P27在蛋白水平上表达下调,TRIM24蛋白的表达上调,干扰TRIM24基因后,同样可使TRIM24蛋白表达下调,P27蛋白表达上调。3.划痕实验示:与siNC组比较,siP27组细胞迁移率升高,而siTRIM24组及联合转染组细胞迁移率均降低,且siTRIM24组细胞迁移率较联合转染组降低更高。4.流式细胞检测示:与siNC转染组比较,siTRIM24组细胞凋亡率升高,而siP27组及联合转染组细胞凋亡率均降低,且siP27组较联合转染组有更高的细胞凋亡率地降低。***实验示:与siNC组比较,siP27组细胞增殖率升高,而siTRIM24及联合转染组细胞增殖率均降低,且联合转染组较siTRIM24组细胞增殖率更高。结论:1.沉默TRIM24基因可以上调乳腺癌MBA-MB-231细胞系中P27基因在mRNA分子水平及蛋白水平的表达,反之,沉默P27基因也可引起TRIM24基因表达的上调,提示TRIM24可能通过促进P27降解来调节细胞周期相关蛋白的表达,从而促进乳腺癌的发生发展。2.沉默TRIM24基因能够降低乳腺癌MDA-MB-231细胞系细胞的生长增殖及细胞迁移能力,增加细胞凋亡能力,提示TRIM24对乳腺癌细胞的生物学行为具有重要影响。3.沉默P27基因能够增加乳腺癌MDA-MB-231细胞系细胞生长增殖及侵袭迁移能力,降低细胞凋亡,对三阴性乳腺癌的发展中起重要作用。