雌激素延缓皮肤老化作用机制的初步探讨

作     者：左俊 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李勤

授予年度：2013年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：雌激素(二醇) ICI-182780 SB203580 PD98059 SP600125 成纤维细胞 苯甲酸雌二醇 皮肤老化 超氧化物歧化酶(SOD) 羟脯氨酸(HYP) 丙二醛(MDA) 

摘      要：第一部分雌二醇对皮肤成纤维细胞增殖迁移影响及其调控机制的实验研究 目的：观察雌激素(17β-estrogen,17β-E2)对体外培养的正常人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblast,HSFB)增殖与迁移的影响,探究雌激素调控人皮肤成纤维细胞增殖是否受到丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)的影响,弄清其可能的调控途径及机制。 方法：采用酶消化法体外分离培养正常人皮肤成纤维细胞,取第3-6代细胞用于实验;1.采用MTT法,分别于不同浓度17β-E2、17β-E2+雌激素p受体拮抗剂ICI-182780和空白干预后24、48、72、96h,检测成纤维细胞的分裂增殖活力;2.建立体外细胞划痕(Scratch-Wound)模型,分别于模型制备后24、48h、72h利用倒置相差显微镜观察细胞在不同浓度17β-E2、17β-E2+ICI-182780和空白干预下的迁移情况;3.利用免疫细胞化学技术检测成纤维细胞爬片在17β-E2、17β-E2+ICI-182780和空白干预后TGFβ1蛋白表达的变化;4.流式细胞术检测17β-E2及雌激素p受体拮抗剂ICI-182780对成纤维细胞周期分布的影响;5.按干预因素的不同将细胞分为6组：空白对照组(A组)、17β-E2组(B组)、17β-E2+ICI-182780组(C组)、17β-E2+PD98059组(D组)、17β-E2+SP600125组(E组)和17β-E2+SB203580组(F组),收集经上述各激酶抑制剂和(或)雌激素处理后的成纤维细胞,提取总RNA和总蛋白,分别利用荧光定量PCR和Western-Blot技术检测各组细胞增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen, PCNA) mRNA和蛋白的表达变化情况。 结果：1.(1)MTT检测发现,24h时,各个浓度(10-8-10-12mol/L)雌激素刺激组细胞增殖效应与空白对照组无显著差异(0.118±0.005、0.113±0.007、0.128±0.013、0.113±0.006、0.122±0.012vs0.115±0.007)(P0.05);48、72、96h时,均以10-10mol/l雌激素组促增殖效应最强(48h,0.208±0.015vs0.121±0.015、0.137±0.017、0.172±0.012、0.137±0.019);其中72、96h时各浓度组雌激素促增殖效应均显著强于空白组(72h,0.245±0.028、0.303±0.022、0.378±0.041、0.276±0.036、0.232±0.022vs0.166±0.025;96h,0.344±0.036、0.406±0.033、0.485±0.031、0.386±0.032、0.368±0.034vs0.196±0.033)(P0.05);而48、72、96h时,A组促增殖效应均明显强于另外两组(48h,0.211±0.015vs0.119±0.016、0.136±0.015;72h,0.352±0.049vs0.168±0.030、0.232±0.025;0.486±0.028vs0.196±0.024、0.368±0.034)(P0.05),但72、96h时均显著强于C组(72h,0.232±0.025vs0.168±0.030;96h,0.368±0.034vs0.196±0.024)(P 0.05);(2)24h、48h、72h时,10-8mol/l雌激素组