洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表达的影响

作     者：向曦 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈琢

授予年度：2011年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：洁泽1号 人阴道上皮细胞 白色念珠菌 粘附 天然免疫 Toll样受体 NF-κB 阴道上皮细胞 

摘      要：目的: 观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响。进一步明确洁泽1号防治外阴阴道假丝酵母菌病可能的作用机制。 方法: 设置模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞(VK2/E6E7)以不同药物的处理相应时间,即洁泽1号与细胞共孵育72小时、小檗碱与细胞共孵育48小时、甘露聚糖与细胞共孵育2小时、高碘酸与细胞共孵育10分钟后,给予已标记FITC的白色念珠菌室温下避光摇床共孵育2小时。MTT法检测洁泽1号及小檗碱的药物细胞毒性、流式细胞术检测白色念珠菌与阴道上皮细胞的粘附率。 结果: 1、洁泽1号、小檗碱对VK2/E6E7细胞的药物毒性: MTT法检测药物的细胞毒性,结果:洁泽1号对VK2/E6E7细胞的IC50为100.8279mg/ml,IC20为36.0579mg/ml。小檗碱对VK2/E6E7细胞的IC50为21.2164umol/L, IC2010.696umol/L。 2、洁泽1号对白色念珠菌与上皮细胞粘附率的影响:阴道上皮细胞与白色念珠菌孵育2小时后,流式细胞术检测法检测白色念珠菌与VK2/E6E7细胞的粘附率:模型组粘附率为(24.5768+1.575)%;甘露聚糖组粘附率为(7.2167+0.3667)%;高碘酸组粘附率为(22.7767+2.3034)%,;洁泽1号粘附率为(11.05+0.3897)%,小檗碱组粘附率为(12.4667+1.266)%。洁泽1号组、小檗碱组较模型组VK2/E6E7细胞与白念菌粘附率下降,结果有统计学意义(p0.05)。 结论: 中药复方洁泽1号能减少白色念珠菌与宿主细胞,即VK2/E6E7的粘附,增强阴道上皮细胞抵抗念珠菌入侵的能力。 目的: 研究洁泽1号对经白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞,其天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的影响,探讨洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫机制。 方法: 设置空白对照组、模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞与白色念珠菌热灭活孢子37℃共培养12小时后,与药物共孵育相应时间。免疫荧光技术观察TLR4在胞浆的表达时间以及NF-κB由胞浆进入胞核的时间,Western-blotting技术检测经白色念珠菌刺激后阴道上皮细胞TLR4的表达及NF-κB在细胞核内的表达。 结果: 1、TLR4在细胞浆及NF-κB由胞浆进入胞核的时序变化 予白色念珠菌热灭活孢子与阴道上皮细胞37℃共培养,激光共聚焦显微镜观察可见:共培养2小时后,TLR4开始表达,4小时、6小时后TLR4表达逐渐增多,12小时表达达到高峰,24小时表达开始回落。NF-κB亦以同样的时间趋势进入细胞核内。即白色念珠菌与细胞共培养12小时为TLR4与NF-κB的表达高峰的时相。 2、白色念珠菌刺激后各组VK2/E6E7细胞TLR4及NF-κB的表达 在TLR4的表达上,模型组与正常组相比,TLR4表达增多,结果有极显著统计学意义(P0.05);洁泽1号组、小檗碱组、高碘酸组较模型组减少,均有极显著统计学意义(P0.05)。 结论: 洁泽1号下调感染白色念珠菌后VK2/E6E7细胞天然免疫因子TLR4的表达、减少细胞内NF-κB的激活,可能因此导致其下游炎性因子分泌减少,起到阻止急性炎症反应的作用。