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洁泽1号对阴道上皮细胞模式识别受体Dectin-1表达的影响

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洁泽1号对阴道上皮细胞模式识别受体Dectin-1表达的影响

作者：姚婷华中科技大学

学位级别：硕士

目的观察人永生化阴道上皮细胞（VK2/E6E7）经白色念珠菌刺激后其模式识别受体Dectin-1及衔接分子Syk表达的变化,并观察中药复方洁泽1号对其表达的影响，探讨洁泽1号是否可能通过Dectin-1/syk信号途径在人阴道上皮细胞抗白色念珠菌天... 详细信息

目的观察人永生化阴道上皮细胞（VK2/E6E7）经白色念珠菌刺激后其模式识别受体Dectin-1及衔接分子Syk表达的变化,并观察中药复方洁泽1号对其表达的影响，探讨洁泽1号是否可能通过Dectin-1/syk信号途径在人阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫中发挥作用。方法第一部分：白色念珠菌对Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响设置空白对照组（体外培养VK2/E6E7）及体外培养热灭活白色念珠菌与VK2/E6E7共孵育各时间段组(6h、12h、24h、48h），RT-PCR检测Dectin-1和Syk的表达变化。第二部分：洁泽1号对VK2/E6E7Dectin-1、Syk表达的影响 1.洁泽1号、小檗碱、酵母聚糖对VK2/E6E7细胞毒性实验 2.洁泽1号对VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响根据第一部分实验结果，将VK2/E6E7与热灭活的白色念珠菌共培养24小时后，随机分为：模型组、洁泽1号组、小檗碱组、酵母聚糖组。各组分别给与相应药物及时间干预（根据细胞毒性实验结果确定各药物浓度和作用时间），另设正常对照组。Western-blotting技术检测细胞Dectin-1和SyK的表达。结果第一部分：白色念珠菌对Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响 RT-PCR各组Ct值表明，人阴道上皮细胞VK2/E6E7中构成性表达Dectin-1、SykmRNA。热灭活白色念珠菌与VK2/E6E7共孵育24h后，细胞Dectin-1的表达明显上调（P1）;48h后表达量下降。下游衔接分子Syk的表达趋势与Dectin-1一致。第二部分：洁泽1号对VK2/E6E7Dectin-1、Syk表达的影响 1.洁泽1号、小檗碱、酵母聚糖对VK2/E6E7的细胞毒性实验洁泽1号对VK2/E6E7的IC10为10.792mg/ml，作用时间为24小时;小檗碱对VK2/E6E7的IC10为3.626μmol/L，作用时间为12小时;酵母聚糖对VK2/E6E7的IC10为51.978mg/ml，作用时间为12小时。 2.洁泽1号对VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响Dectin-1的表达情况如下：模型组与正常组相比，Dectin-1表达升高，统计学具有显著性差异（P1）;洁泽1号组、小檗碱组、酵母聚糖组Dectin-1表达较模型组降低，统计学具有显著性差异（P1）;小檗碱组、酵母聚糖与洁泽1号组之间Dectin-1表达无统计学差异（P>0.05）。 Syk的表达趋势与Dectin-1一致，即与正常组相比，模型组Syk表达升高，统计学具有显著性差异（P1）;洁泽1号组、小檗碱组、酵母聚糖组Syk表达较模型组降低，统计学具有显著性差异（P1）;小檗碱组、酵母聚糖与洁泽1号组之间Syk表达无统计学差异（P>0.05）。结论 1.VK2/E6E7中构成性表达Dectin-1、SykmRNA。 2.热灭活白色念珠菌可上调VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1的表达，其衔接分子Syk的表达也随之上调，说明热灭活白色念珠菌可被VK2/E6E7表面Dectin-1识别，并通过Syk依赖性途径介导固有免疫反应。Dectin-1在识别白色念珠菌和启动宿主免疫防御中起重要作用。 3.洁泽1号能下调感染白色念珠菌VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1及衔接分子Syk的表达，可能因此导致其下游炎性因子分泌减少，限制局部炎症反应。

关键词：洁泽1号人阴道上皮细胞（VK2/E6E7）白色念珠菌 Dectin-1 Syk

洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表达的影响

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洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和N...

作者：向曦华中科技大学

学位级别：硕士

目的: 观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响。进一步明确洁泽1号防治外阴阴道假丝酵母菌病可能的作用机制。方法: 设置模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。... 详细信息

目的: 观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响。进一步明确洁泽1号防治外阴阴道假丝酵母菌病可能的作用机制。方法: 设置模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞(VK2/E6E7)以不同药物的处理相应时间,即洁泽1号与细胞共孵育72小时、小檗碱与细胞共孵育48小时、甘露聚糖与细胞共孵育2小时、高碘酸与细胞共孵育10分钟后,给予已标记FITC的白色念珠菌室温下避光摇床共孵育2小时。MTT法检测洁泽1号及小檗碱的药物细胞毒性、流式细胞术检测白色念珠菌与阴道上皮细胞的粘附率。结果: 1、洁泽1号、小檗碱对VK2/E6E7细胞的药物毒性: MTT法检测药物的细胞毒性,结果:洁泽1号对VK2/E6E7细胞的IC50为100.8279mg/ml,IC20为36.0579mg/ml。小檗碱对VK2/E6E7细胞的IC50为21.2164umol/L, IC2010.696umol/L。 2、洁泽1号对白色念珠菌与上皮细胞粘附率的影响:阴道上皮细胞与白色念珠菌孵育2小时后,流式细胞术检测法检测白色念珠菌与VK2/E6E7细胞的粘附率:模型组粘附率为(24.5768+1.575)%;甘露聚糖组粘附率为(7.2167+0.3667)%;高碘酸组粘附率为(22.7767+2.3034)%,;洁泽1号粘附率为(11.05+0.3897)%,小檗碱组粘附率为(12.4667+1.266)%。洁泽1号组、小檗碱组较模型组VK2/E6E7细胞与白念菌粘附率下降,结果有统计学意义(p1),高碘酸组较模型组结果无统计学意义(p>0.05)。结论: 中药复方洁泽1号能减少白色念珠菌与宿主细胞,即VK2/E6E7的粘附,增强阴道上皮细胞抵抗念珠菌入侵的能力。目的: 研究洁泽1号对经白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞,其天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的影响,探讨洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫机制。方法: 设置空白对照组、模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞与白色念珠菌热灭活孢子37℃共培养12小时后,与药物共孵育相应时间。免疫荧光技术观察TLR4在胞浆的表达时间以及NF-κB由胞浆进入胞核的时间,Western-blotting技术检测经白色念珠菌刺激后阴道上皮细胞TLR4的表达及NF-κB在细胞核内的表达。结果: 1、TLR4在细胞浆及NF-κB由胞浆进入胞核的时序变化予白色念珠菌热灭活孢子与阴道上皮细胞37℃共培养,激光共聚焦显微镜观察可见:共培养2小时后,TLR4开始表达,4小时、6小时后TLR4表达逐渐增多,12小时表达达到高峰,24小时表达开始回落。NF-κB亦以同样的时间趋势进入细胞核内。即白色念珠菌与细胞共培养12小时为TLR4与NF-κB的表达高峰的时相。 2、白色念珠菌刺激后各组VK2/E6E7细胞TLR4及NF-κB的表达在TLR4的表达上,模型组与正常组相比,TLR4表达增多,结果有极显著统计学意义(P1)。甘露聚糖组与模型组相比,TLR4表达无统计学意义(P>0.05);洁泽1号组、小檗碱组、高碘酸组较模型组减少,均有极显著统计学意义(P1)。在NF-κB的表达上,模型组与正常组相比,NF-κB表达增多,结果有极显著统计学意义(P1)。高碘酸组、洁泽1号组、小檗碱较模型组NF-κB表达减少,结果均有极显著统计学意义(P1);甘露糖组较模型组NF-κB表达增多,其结果有统计学意义(P1),高碘酸、小檗碱与洁泽1号组之间无统计学差异(P>0.05)。结论: 洁泽1号下调感染白色念珠菌后VK2/E6E7细胞天然免疫因子TLR4的表达、减少细胞内NF-κB的激活,可能因此导致其下游炎性因子分泌减少,起到阻止急性炎症反应的作用。

关键词：洁泽1号人阴道上皮细胞白色念珠菌粘附天然免疫 Toll样受体 NF-κB 阴道上皮细胞

洁泽1号对阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫相关因子影响的实验研究

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洁泽1号对阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫相关因子影响的实验...

作者：董芹华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分：洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌TLR2、MyD88mRNA影响的实验研究目的：观察中药复方洁泽1号及其主药有效成分小檗碱对永生化人阴道上皮细胞（VK2/E6E7）天然免疫因子TLR2、MyD88mRNA的影响，探讨洁泽1号是否可能通过T... 详细信息

第一部分：洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌TLR2、MyD88mRNA影响的实验研究目的：观察中药复方洁泽1号及其主药有效成分小檗碱对永生化人阴道上皮细胞（VK2/E6E7）天然免疫因子TLR2、MyD88mRNA的影响，探讨洁泽1号是否可能通过TLRs信号途径在人阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫中发挥作用，为明确洁泽1号预防和治疗外阴阴道假丝酵母菌病的机制提供进一步的实验依据。方法：设置空白对照组（单独培养的VK2/E6E7）、白色念珠菌热灭活孢子与VK2/E6E7共培养（比例为10:1）各时间段组（1h，3h，6h，12h，24h，48h）。提取各组细胞总RNA，实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)检测细胞TLR2、MyD88mRNA的表达。药物预防实验：设置空白对照组，模型组（VK2/E6E7与白色念珠菌共孵育），细胞+洁泽1号+白色念珠菌组、细胞+小檗碱+白色念珠菌组、细胞+甘露聚糖+白色念珠菌组（药物与细胞共孵育后，再加入白色念珠菌共培养）。药物治疗实验：设置空白对照组，模型组（白色念珠菌与VK2/E6E7共孵育），细胞+白色念珠菌+洁泽1号组、细胞+白色念珠菌+小檗碱组、细胞+白色念珠菌+甘露聚糖组（白色念珠菌与细胞共孵育后，再加入药物）。 MTT法检测最低无细胞毒药物浓度。各组细胞培养相应时间后，吸弃细胞上清液，提取细胞总RNA，通过实时定量PCR检测各组细胞中TLR2、MyD88mRNA的表达。结果： 1.实时定量PCR各组Ct值表明，人阴道上皮细胞VK2/E6E7中构成性表达TLR2、MyD88mRNA。白色念菌热灭活孢子与VK2/E6E7共培养后，TLR2、MyD88mRNA表达量呈升高趋势。共培养12h时，细胞TLR2、MyD88mRNA的表达量最高，与空白对照组相比统计学具有极显著性差异（P1）;24h后，表达量开始下降。而24h MyD88mRNA表达量与空白对照组相比，仍具有显著性差异（P洁泽1号、小檗碱、甘露聚糖对VK2/E6E7细胞的毒性实验：MTT法检测药物细胞毒性：洁泽1号对VK2/E6E7的IC10为14.7033mg/ml，作用时间为24小时;小檗碱对VK2/E6E7的IC10为6.1645μmol/L，作用时间为12小时;甘露聚糖对VK2/E6E7的IC10为24.1823mg/ml，作用时间为2小时。 3.洁泽1号、小檗碱、甘露聚糖对VK2/E6E7细胞TLR2、MyD88的影响：预防实验：与空白对照组相比，模型组细胞TLR、MyD88mRNA表达升高，差异统计学有极显著意义（P1）;与模型组相比，洁泽1号和小檗碱预防组各因子mRNA表达量均明显降低（P1），洁泽1号组与小檗碱组组间相比无明显差异;甘露聚糖预防组TLR2、MyD88表达亦降低（P1），（P洁泽1号组TLR2、MyD88亦升高（P1），（P洁泽1号预处理细胞后，能显著抑制天然免疫因子TLR2、MyD88的表达，限制局部炎症反应;而对于已感染白色念珠菌的细胞，洁泽1号能在感染早期促进细胞的天然免疫功能，此功能可能是通过TLR2-MyD88依赖性途径实现。第二部分：洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌HBD-2及IL-8、IL-1β影响的实验研究目的：观察中药复方洁泽1号及其主药有效成分小檗碱对永生化人阴道上皮细胞（VK2/E6E7）HBD-2mRNA及IL-8、IL-1β蛋白表达的影响，探讨洁泽1号在抗白色念珠菌感染时，是否通过影响细胞分泌表达炎性因子的能力来抵御感染，为明确洁泽1号预防和治疗外阴阴道假丝酵母菌病的机制提供进一步的实验依据。方法： HBD-2预防与治疗实验分组和实验方法：同第一部分。 IL-8、IL-1β实验分组：预防实验：设置空白对照组，模型组（VK2/E6E7与白色念珠菌共孵育），细胞+洁泽1号组、细胞+小檗碱组（仅用药物处理细胞），细胞+洁泽1号+白色念珠菌组、细胞+小檗碱+白色念珠菌组（药物与细胞共孵育后，再加入白色念珠菌共培养）。治疗实验：设置空白对照组，模型组（白色念珠菌与细胞共孵育），细胞+白色念珠菌+洁泽1号组、细胞+白色念珠菌+小檗碱组

关键词：洁泽1号人阴道上皮细胞白色念珠菌 TLR2 MyD88 HBD-2 IL-8 IL-1β

洁泽1号对阴道乳酸菌及免疫蛋白SP-D、sIgA及SLPI影响的实验研究

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洁泽1号对阴道乳酸菌及免疫蛋白SP-D、sIgA及SLPI影响的实验研究

洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表达的影响

第十一届全国中西医结合基础理论学术研讨会

作者：龚萍贺文静陈琢毕智马永贵古晓鸽黄光英华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合科华中科技大学同济医学院中西医结合研究所华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部

目的:研究中药复方洁泽1号对生理状态及白色念珠菌性阴道炎小鼠阴道产过氧化氢乳酸菌、pH值、过氧化氢浓度、SP-D、sIgA及SLPI的影响,评价洁泽1号对阴道内环境的影响。方法:1.将正常小鼠分为正常组、10%N-9组、空白凝胶组、2%洁泽1号组(... 详细信息

目的:研究中药复方洁泽1号对生理状态及白色念珠菌性阴道炎小鼠阴道产过氧化氢乳酸菌、pH值、过氧化氢浓度、SP-D、sIgA及SLPI的影响,评价洁泽1号对阴道内环境的影响。方法:1.将正常小鼠分为正常组、10%N-9组、空白凝胶组、2%洁泽1号组(2%JZ1)、1%洁泽1号组(1%JZ1),每组设24h和72h两个亚组,分别于给药后24h和72h观察阴道pH值、产过氧化氢的乳杆菌、过氧化氢浓度及SP-D影响;2.建立白色念珠菌性阴道炎小鼠模型,实验分为正常对照组、模型组、空白凝胶组、联苯苄唑组、2%洁泽1号组(2%JZ1)、1%洁泽1号组(1%JZ1)。分别于造模前24h和治疗的第0、4、8、12天观察小鼠阴道阴道pH值、产过氧化氢的乳杆菌,治疗的第0、12天检测小鼠阴道灌洗液中sIgA的表达,治疗第12天检测阴道组织中SLPI的表达。结果:生理状态下1.使用洁泽1号与正常组相比,小鼠阴道pH值、产过氧化氢乳酸菌、过氧化氢浓度均无明显变化,对阴道组织SP-D表达无影响;2.白色念珠菌性阴道炎病理状态下,模型鼠阴道乳杆菌数量减少,sIgA和SLPI表达升高,2%JZ1组治疗后各指标恢复到正常水平(P>0.05);1%JZ1组小鼠虽各个指标有改善,但未恢复到正常水平,(P洁泽1号对阴道内环境无显著性影响,对白色念珠菌性阴道炎小鼠,有效治疗剂量的洁泽1号能增加阴道乳酸菌数量及上调相关免疫蛋白的表达,通过促进阴道菌群平衡,提高阴道局部固有免疫因子的表达可能是其治疗白色念珠菌性阴道炎的作用机制之一。

关键词：乳酸杆菌过氧化氢 SP-D SLPI sIgA 白色念珠菌 N-9 洁泽1号

来源： cnki会议评论

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洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和N...

洁泽1号凝胶对念珠菌性阴道炎小鼠阴道内乳杆菌、SIgA、SLPI的影响

第八届全国中西医结合妇产科学术大会

作者：向曦陈琢徐丽君马永贵陆付耳黄光英华中科技大学同济医学院中西医结合研究所

目的观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响以及洁泽1号对白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞,其天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的干预作用,探讨洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫机制。方法... 详细信息

目的观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响以及洁泽1号对白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞,其天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的干预作用,探讨洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫机制。方法培养人阴道上皮细胞株(VK2/E6E7)。设置空白对照组、模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞(VK2/E6E7)以不同药物的处理相应时间,MTT法检测洁泽1号及小檗碱的药物细胞毒性、流式细胞术检测白色念珠菌与阴道上皮细胞的粘附率。另将人阴道上皮细胞与白色念珠菌灭活孢子37℃共培养12小时后,与药物共孵育相应时间。免疫荧光技术观察TLR4在胞浆的表达时间以及NF-κB由胞浆进入胞核的时间,Western-blotting技术检测经白色念珠菌刺激后阴道上皮细胞TLR4的表达及NF-κB在细胞核内的表达。结果洁泽1号组、小檗碱组较模型组VK2/E6E7细胞与白念菌粘附率下降,结果有统计学意义(p1),高碘酸组较模型组结果无统计学意义(p>0.05)。在TLR4的表达上,模型组与正常组相比,TLR4表达增多,结果有极显著统计学意义(P1)。甘露聚糖组与模型组相比,TLR4表达无统计学意义(P>0.05);洁泽1号组、小檗碱组、高碘酸组较模型组减少,均有极显著统计学意义(P1)。在NF-κB的表达上,模型组与正常组相比,NF-κB表达增多,结果有极显著统计学意义(P1)。高碘酸组、洁泽1号组、小檗碱较模型组NF-κB表达减少,结果均有极显著统计学意义(P1);甘露糖组较模型组NF-κB表达增多,其结果有统计学意义(P1),高碘酸、小檗碱与洁泽1号组之间无统计学差异(P>0.05)。结论中药复方洁泽1号能减少白色念珠菌与宿主细胞,即VK2/E6E7的粘附,增强阴道上皮细胞抵抗念珠菌入侵的能力。洁泽1号下调感染白色念珠菌后VK2/E6E7细胞天然免疫因子TLR4的表达、减少细胞内NF-κB的激活,可能因此导致其下游炎性因子分泌减少,起到阻止急性炎症反应的作用。

关键词：洁泽1号人阴道上皮细胞白色念珠菌粘附 Toll样受体 NF-κB

来源： cnki会议评论

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洁泽1号凝胶对念珠菌性阴道炎小鼠阴道内乳杆菌、SIgA、SLPI的影响

基于STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路研究中药复方洁泽1号体外抗HSV-2的效应与机制

第八届全国中西医结合妇产科学术大会

作者：陈琢贺文静马永贵龚萍黄冬梅黄光英华中科技大学同济医学院中西医结合研究所华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合科

目的观察中药复方洁泽1号凝胶对念珠菌性阴道炎小鼠阴道内乳杆菌、S[gA及SLPI的影响。方法取雌性昆明小鼠210只,随机分成7组,每组30只。每只小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇(E)0.025mg,72小时后开始造模,每只小鼠阴道内接种白色念珠菌液5×104... 详细信息

目的观察中药复方洁泽1号凝胶对念珠菌性阴道炎小鼠阴道内乳杆菌、S[gA及SLPI的影响。方法取雌性昆明小鼠210只,随机分成7组,每组30只。每只小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇(E)0.025mg,72小时后开始造模,每只小鼠阴道内接种白色念珠菌液5×104个,正常对照组除外。造模后第二天,小鼠阴道灌洗液图片镜检,发现菌丝为造模成功,分别用相应的药物治疗。分别于造模前24h和治疗的第0、4、8、12天观察小鼠阴道中乳杆菌菌落计数结果,治疗的第0、12天检测小鼠阴道灌洗液中SIgA的表达,治疗12天后将小鼠脱臼处死,检测阴道组织中SLPI的表达。结果模型组小鼠阴道乳杆菌数量减少,SIgA和SLPI表达升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P1);用药治疗后,联苯苄唑组和2%洁泽1号凝胶组个指标恢复到正常水平,与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);1%洁泽1号组和小檗碱凝胶组小鼠虽不能使各个指标恢复到正常水平,但是都有改善,与模型组和空白凝胶组相比,差异有统计学意义(P洁泽1号凝胶可以促进念珠菌性阴道炎小鼠阴道内乳杆菌、SIgA、SLPI逐渐恢复到正常水平,其中2%洁泽1号凝胶效果显著。

关键词：洁泽1号阴道乳杆菌分泌型免疫球蛋白A 分泌型白细胞蛋白酶抑制剂

来源： cnki会议评论

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基于STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路研究中药复方洁泽1号体外抗HS...

作者：刘甜丽华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】基于干扰素基因刺激蛋白(Stimulator of interferon genes,STING)介导的Ⅰ型干扰素(Interferon Type I,IFN-I)生成作用,探究中药复方洁泽1号体外抗单纯疱疹病毒2型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)感染的效应机制。【方法... 详细信息

【目的】基于干扰素基因刺激蛋白(Stimulator of interferon genes,STING)介导的Ⅰ型干扰素(Interferon Type I,IFN-I)生成作用,探究中药复方洁泽1号体外抗单纯疱疹病毒2型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)感染的效应机制。【方法】1.使用非洲绿猴肾上皮细胞(Vero)作为宿主扩增HSV-2,用收获的HSV-2病毒按照一定的感染复数(5,2,1,0.5,0.2,0.1 MOI)感染人永生化表皮细胞(HaCaT),24 h后使用CCK8试剂盒检测细胞存活率,在光学显微镜下观察不同感染复数下细胞的形态学变化。采用Western blot法、免疫荧光法以及q RT-PCR法检测正常细胞和感染HSV-2细胞中病毒蛋白g D的表达水平。2.将稀释为不同浓度(100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56 mg/m L)的洁泽1号(Jie Ze-1,JZ-1)药液与HaCaT细胞共孵育24 h,CCK8法检测各组细胞存活率,以明确JZ-1对HaCaT细胞的细胞毒作用。从JZ-1的最高无细胞毒浓度起下设浓度梯度,设置正常对照组,HSV-2感染模型组,不同浓度JZ-1+HSV-2组,探索JZ-1的抗病毒效应。Ed U法检测JZ-1对HSV-2感染细胞增殖状态的影响,Western blot、免疫荧光以及q RT-PCR法检测JZ-1对HaCaT细胞中HSV-2蛋白g D表达水平的影响。3.筛选STING特异性si RNA,在HaCaT细胞中下调STING的表达,同时提取STING过表达质粒(p CDNA3.1-3×HA-TMEM173),在人胚肾细胞(HEK293T)中过表达STING,用Western blot、q RT-PCR法检测不同处理下细胞STING的表达水平,验证si RNA序列和过表达质粒的工作效率。使用台盼蓝染色法检测不同处理组的细胞培养一段时间(1、2、3、4、5、6天)后细胞的死亡率,评估转染si RNA序列和过表达质粒对细胞活性的影响。使用HSV-2感染STING敲低或过表达的细胞,用Western blot法检测不同处理组的细胞中HSV-2病毒蛋白g D的表达情况,TCID50法测定HSV-2的病毒滴度,研究STING表达水平对HSV-2在细胞中复制的影响。4.在HaCaT细胞中设置正常对照组,模型组(HSV-2感染),药物组(HSV-2+JZ-1),通过Western blot、q RT-PCR、ELISA和免疫荧光实验研究洁泽1号干预下STING介导的Ⅰ型干扰素生成相关信号通路中关键分子的变化。分别使用si RNA和STING过表达质粒调节HaCaT细胞中STING的表达,使用HSV-2感染细胞并加以药物干预,检测病毒蛋白g D的表达,探索洁泽1号是否通过STING发挥抗病毒效应。5.qRT-PCR法检测正常对照组、模型组和药物组细胞STING的m RNA表达。使用蛋白质合成抑制剂CHX和蛋白酶体抑制剂MG132处理各组细胞,Western blot法检测STING蛋白的表达情况,免疫沉淀实验检测各处理组STING的泛素化水平,探究HSV-2和洁泽1号对STING蛋白的调控机制。【结果】1.成功构建HSV-2体外感染HaCaT细胞模型。2.洁泽1号浓度在25 mg/m L及以下时对HaCaT无细胞毒作用,25 mg/m L的洁泽1号在HaCaT细胞系中抗HSV-2效果最佳,能够明显提高病毒感染后细胞的存活率,促进细胞增殖,抑制病毒在胞内复制。3.与阴性对照组相比,STING敲减细胞感染HSV-2后,细胞中病毒蛋白g D的表达更多,病毒滴度更高;STING过表达细胞中病毒蛋白g D相对于阴性对照组表达降低,病毒滴度也更低。此外,相比于未感染病毒的细胞,HSV-2病毒感染后细胞中STING的表达量明显降低。4.与HSV-2感染的模型组相比,洁泽1号能够增加STING蛋白的表达,促进下游分子TBK1和IRF3的磷酸化激活,提高IFN-β的分泌。当STING的表达被抑制后,洁泽1号的抗病毒效果也随之下降。5.正常组、模型组和药物组中STING的m RNA表达水平无明显变化。抑制蛋白质合成途径后,模型组STING蛋白半衰期较正常组明显缩短,药物组STING的半衰期显著高于模型组。使用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后,各组的STING蛋白水平无明显差异。与正常组相比,模型组STING的泛素化水平显著增高,而JZ-1的STING蛋白泛素化水平较模型组显著下降。【结论】在体外实验中,细胞中的STING蛋白能显著抑制HSV-2的复制,HSV-2感染会诱导细胞中STING蛋白经由泛素蛋白酶体途径发生降解,而洁泽1号则可以有效抑制这一过程,稳定STING的表达,进而激活下游信号通路,促进细胞因子IFN-β分泌,发挥抗病毒作用。

关键词：单纯疱疹病毒2型洁泽1号干扰素基因刺激蛋白 Ⅰ型干扰素抗病毒感染

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洁泽2号预防白色念珠菌阴道炎的实验研究

中国妇幼保健 2009年第6期24卷 788-790页

作者：陈琢孔小锋王容马永贵徐丽君陆付耳黄光英华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合科湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院药剂科华中科技大学同济医学院中西医结合研究所

目的:观察洁泽2号(JZ2)中药复方洁泽1号(JZ1)与外用杀精剂壬苯醇醚(N-9)混合制剂体外对白色念珠菌的抑菌活性及对小鼠白色念珠菌性阴道炎的预防作用。方法:采用琼脂稀释多点接触法检测最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);造模前阴道... 详细信息

目的:观察洁泽2号(JZ2)中药复方洁泽1号(JZ1)与外用杀精剂壬苯醇醚(N-9)混合制剂体外对白色念珠菌的抑菌活性及对小鼠白色念珠菌性阴道炎的预防作用。方法:采用琼脂稀释多点接触法检测最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);造模前阴道内按分组分别注入各药物凝胶20μl,1min后阴道接种白色念珠菌液5×104个/只,分别于造模后第2、4、7、14天观察小鼠阴道灌洗液菌丝生成及菌落计数结果,阴道、子宫组织PAS染色,各组阴道组织的炎症分值及阴道炎预防率。结果:体外实验中,JZ2对念珠菌的抑制作用较N-9好,菌液浓度为5×105个/ml时,JZ2的MIC和MBC均为1∶64(含JZ17.8mg,N-90.78mg);随着JZ2凝胶中JZ1浓度的降低,小鼠白色念珠菌性阴道炎预防率逐渐下降,呈现一定的量效关系。JZ2高剂量凝胶组预防率可达65.0%,与模型组预防率0、空白凝胶组预防率20.0%比较差异有统计学意义(P<0.01),与西药对照组(联苯苄唑凝胶)作用相当,但强于N-9组,且差异有统计学意义(P<0.05)。JZ2中、低剂量凝胶组预防率较低,但与模型组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外实验中JZ2(含JZ17.8mg,N-90.78mg)即可抑制念珠菌的生长;JZ2凝胶对白色念珠菌性阴道炎具有较好的预防作用。

关键词：洁泽2号洁泽1号壬苯醇迷白色念珠菌阴道炎预防

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洁泽2号体外杀精及大鼠阴道避孕实验

中国妇幼保健 2009年第29期24卷 4140-4143页

作者：孔小锋陈琢徐萍王容马永贵徐丽君陆付耳华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合科湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部华中科技大学同济医学院中西医结合研究所

目的:观察中药复方药液洁泽1号(Jieze NO.1,JZ1)对外用杀精剂壬苯醇醚(N-9)的杀精增效作用及洁泽2号(Jieze NO.2,JZ2,JZ1与N-9混合制剂)凝胶大鼠阴道内用药的避孕(抗生育)效果。方法:采用改良的Sander-cramer方法观察JZ2中N-9的最低杀... 详细信息

目的:观察中药复方药液洁泽1号(Jieze NO.1,JZ1)对外用杀精剂壬苯醇醚(N-9)的杀精增效作用及洁泽2号(Jieze NO.2,JZ2,JZ1与N-9混合制剂)凝胶大鼠阴道内用药的避孕(抗生育)效果。方法:采用改良的Sander-cramer方法观察JZ2中N-9的最低杀精浓度对正常人精子前向运动率、活动率和存活率的影响;大鼠阴道内给予JZ2药物凝胶后雌雄合笼,分别于交配后1 min、3 min、5 min、10 min观察阴道内精子活动情况,并观察各组避孕率。结果:N-9 20 s、3 min最低杀精浓度均为0.25 mg/ml,与洁泽1号混合(即JZ2)后,N-9最低杀精浓度分别为0.125 mg/ml、0.062 5 mg/ml。交配后1 min,各单纯N-9及JZ2凝胶组大鼠阴道内均未见活动精子。N-9(12%及以上浓度)、JZ2(含10%及以上浓度N-9)各组均有较高的避孕率,与自然对照组及空白凝胶组之间的差异均有极显著统计学意义(P<0.01)。JZ2(含14%、12%N-9)药物凝胶组抗生育率均可达100%,与14%N-9作用相当。JZ2(含10%N-9及8%N-9)抗生育率分别为90%、40%,与自然对照组之间有统计学差异。JZ2(含12%N-9和10%N-9)凝胶组对大鼠的避孕作用强于相同浓度的N-9组,且比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:由剂量-反应关系曲线可以看出JZ1对N-9的杀精作用具有协同作用,两药混合后(即JZ2)可以减少N-9的剂量;JZ2凝胶大鼠阴道内用药具有较好的抗生育作用,在相同避孕效果下可减少N-9的用量。

关键词：沽泽2号洁泽1号体外杀精凝胶体内避孕