sHLA-G在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究

作     者：王海凤 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡雪梅

授予年度：2013年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：弓形虫 sHLA-G Qa-2 KIR2DL4 不良妊娠 

摘      要：目的：探索可溶性非经典主要组织相容抗原G（soluble non-classic MajorHistocompatibility Antigen/Human Leukocyte Antigen-G，sHLA-G）在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法：1.体内试验:建立C57BL/6小鼠妊娠期弓形虫感染动物模型，实验分为正常对照组、感染组。感染组于孕8天腹腔注射弓形虫速殖子400条;正常组于孕8天腹腔注射等体积的生理盐水。孕14天，对孕鼠进行眼底静脉取血，断颈处死孕鼠，记录妊娠结局，收集羊水、分离子宫和胎盘，制备胎盘组织上清。ELISA检测孕鼠外周血、羊水及胎盘组织上清可溶性非经典主要组织相溶性抗原（Qa-2）的浓度;制备子宫和胎盘细胞悬液，流式细胞术检测Qa-2受体，即蜕膜NK细胞表面抑制性受体NKG2A表达。2.体外实验:建立滋养层细胞系BeWo细胞体系，分别设正常对照组和弓形虫感染组，ELISA检测其上清分泌液中非经典人可溶性白细胞抗原G（sHLA-G）的水平;建立人早孕期蜕膜NK细胞体系，分别设正常对照组和弓形虫感染组，感染组组内再分别设单纯感染组、sHLA-G干预组（sHLA-G组）及sHLA-G抗体中和组（抗体中和组），用流式细胞术检测蜕膜NK细胞表面抑制性受体KIR2DL4表达。通过以上实验明确妊娠期经弓形虫感染后，母胎界面sHLA-G的变化趋势，并进一步验证sHLA-G与NK细胞抑制性受体KIR2DL4表达的相关性，进而揭示sHLA-G在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。结果：1.体内试验：正常对照组孕鼠状态较好，行为活动灵活自如，胎盘和胎鼠大小均匀，血供良好，外观肉红色;感染组孕鼠自感染2天后出现耸毛、精神萎靡等现象，感染后7天明显站立不稳、体温下降，胎盘苍白缺血，平均重量下降，胎鼠血供缺乏，大小不一，重量下降。与正常对照相比，感染后胎盘组织上清、羊水及孕鼠外周血Qa-2的浓度明显升高（P0.05），蜕膜NK细胞表面的NKG2A的表达亦显著升高（P0.05）。2.体外实验：与对照组相比，感染组BeWo培养上清中其sHLA-G水平明显升高（P0.05）;与对照组相比，sHLA-G干预组蜕膜NK细胞表面KIR2DL4表达显著升高（P0.05）;与sHLA-G干预组相比，sHLA-G抗体中和组蜕膜NK细胞表面KIR2DL4的表达显著降低（P0.05）。结论：通过体内外实验均证实弓形虫感染后可导致母胎界面非经典主要组织相容性抗原分泌升高，升高了的sHLA-G导致蜕膜NK细胞表面的抑制性受体KIR2DL4表达升高，sHLA-G及其受体KIR2DL4为母胎界面的参与免疫耐受的一对重要免疫分子，二者表达的升高可能会破坏胎盘免疫防御屏障，而导致弓形虫免疫逃逸，容易穿过胎盘垂直传播，引起胎儿感染，导致流产、胎儿畸形、死胎等不良妊娠结局的发生。