XCT790通过下调雌激素相关受体α的表达抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

作     者：陆蕴红 

作者单位：复旦大学 

学位级别：硕士

导师姓名：施孝金

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：XCT790 血管平滑肌细胞 雌激素相关受体α 增殖 

摘      要：目的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的异常增殖是动脉粥样硬化及PCI术后血管再狭窄等心血管疾病发生和发展的重要病理过程。本研究考察了雌激素相关受体α (estrogen-related receptor α, ERRα)的特异性反向激动剂XCT790对大鼠VSMCs增殖的影响及相关分子信号传导机制,并进一步探讨ERRα作为治疗心血管疾病治疗靶点的可行性。方法采用组织块贴壁法原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,选取3-8代生长状态良好的VSMCs用于实验,以10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)刺激VSMCs增殖。分组后分别加入不同浓度的XCT790干预不同时间,以CCK-8试剂检测XCT790对VSMCs增殖的影响;以RT-PCR考察VSMCs中ERRα及其靶基因PGC-1α、OPN和MCAD的mRNA表达水平;以Western blotting检测ERRα和p-ERK1/2的蛋白表达水平;以ELISA法检测VSMCs中分泌的VEGF蛋白水平。采用SPSS19.0软件进行统计学分析,并用GraphPad Prism5软件作图。所有实验数据均以x±s表示,多样本均数间比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t检验。以P0.05表示结果存在显著差异,P0.01表示结果存在非常显著差异。结果1.本研究采用的组织块贴壁法简便、可靠、经济,以该法原代培养所得的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞活性良好,第3-8代VSMCs纯度高、质量好,可用于进一步的XCT790干预实验。2.XCT790抑制大鼠胸主动脉VSMCs的增殖,在5-20μmol/L剂量范围内呈显著剂量依赖(P0.05),在10～20μmol/L剂量范围内呈显著时间依赖(P0.05)。3.XCT790抑制VSMCs中ERRα的mRNA与蛋白表达,在10～20μmol/L剂量范围内呈显著时间-剂量依赖(P0.05)。4. XCT790干预的VSMCs中,ERRα的下游靶基因PGC-1α、OPN及MCAD的mRNA水平均有不同程度的下调,XCT790浓度在10～20μmol/L范围内时,抑制作用呈时间-剂量依赖(P0.05)。5. XCT790抑制VSMCs中VEGF蛋白分泌,在5～20 μmol/L剂量范围内呈显著时间-剂量依赖(P0.05)。6. XCT790下调VSMCs中p-ERK1/2蛋白表达水平,抑制了ERK磷酸化,在10～20 μmol/L剂量范围内呈显著的时间-剂量依赖特征(P0.05)。结论XCT790可能是通过ERRα依赖的下游靶基因及ERK信号传导途径发挥其对VSMCs增殖的抑制作用,提示ERRα可能成为治疗心血管疾病的一个新的潜在靶点。