K-ras、P53基因突变和Pax2、P53、Ki67蛋白在卵巢浆液性癌中表达的研究

作     者：简丽 

作者单位：宁夏医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王岩

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：卵巢浆液性癌 K-ras P53 Pax2 PCR RFLP 

摘      要：【目的】研究卵巢浆液性癌中k-ras、P53基因突变及Pax2、P53、Ki67蛋白的表达特征，探讨卵巢浆液性癌两级分级系统在临床病理诊断中的应用价值，为提高准确诊断及合理的临床治疗提供依据。 【方法】依照美国MD Anderson癌症中心的Malpica[3]等对卵巢浆液性癌提出的两级分级系统的分级标准，分别选取低级别卵巢浆液性癌25例，高级别卵巢浆液性癌38例作为实验组，另选取卵巢浆液性囊腺瘤20例作为对照组。应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增和直接测序法检测K-ras基因第一外显子的基因突变。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chainreaction-restricted fragment length polymorphism, PCR-RFLP）技术检测P53基因Arg72密码子、第三内含子和第六内含子的突变情况。应用免疫组织化学(immunohistochemisty,IHC)EnVision法检测Pax2、P53、K-i67蛋白的表达水平。用SPSS18.0统计软件进行两独立样本t检验及卡方检验，计算和比较各组基因突变及蛋白阳性表达率，分析其与低、高级别浆液性癌及临床病理特征的相关性。 【结果】 1卵巢浆液性癌中低级别组中K-ras基因突变率(28.0%)显著高于高级别组(5.3%)(P0.05)，浆液性囊腺瘤中未检出突变。 2P53基因第72位密码子三种基因型（CC、CG、 GG）和C、G等位基因在3组分布均无差异（P0.005）。第三内含子含有A’基因型在低级别卵巢浆液性癌组与高级别卵巢浆液性癌组中分布差异有统计学意义（P0.05），其中3例第三内含子A’A’基因纯合突变均发生在高级别浆液性癌组中，低级别组未检测到第三内含子A’A’基因纯合突变。5例第三内含子AA’基因杂合突变均发生在高级别浆液性癌组中，低级别组未检测到第三内含子AA’基因杂合突变。第六内含子的三种基因型（NN、NN’、 N’N’）和N、 N’等位基因频率在卵巢浆液性癌组和卵巢浆液性囊腺瘤组中的分布有统计学差异（P0.05）。 【结论】 1卵巢低、高级别浆液性癌具有不同的分子遗传学、免疫表型。 2在卵巢浆液性癌中，低级别浆液性癌主要发生K‐ras基因第一外显子中第12位和第13位密码子点突变;高级别浆液性癌主要发生P53基因第三内含子和第六内含子的突变。提示低、高级别卵巢浆液性癌不同的基因突变位点在卵巢浆液性癌的发生、发展中起一定作用。 3P53、Pax2、Ki‐67蛋白在低、高级别浆液性癌中表达差异有统计学意义（P0.05）。提示其在卵巢浆液性癌治疗时可作为分子生物学指标。 4卵巢浆液性癌是一组异质性肿瘤，两级分级系统能反映肿瘤生物学及遗传学改变的差异性，体现其在指导临床治疗中的重要价值