人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究

作     者：戴楠 王东 李梦侠 曹晓静 曾林立 廖玲 杨宇馨 DAI Nan;WANG Dong;LI Meng-xia;CAO Xiao-jing;ZENG Lin-li;LIAO Ling;YANG Yu-xin

作者机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心重庆400042 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2009年第31卷第12期

页      面：1123-1126页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(30670628)~~ 

主　　题：人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶 原核表达 蛋白纯化 结构与功能 

摘      要：目的构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析。方法用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1。将重组质粒转化入*** BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白。用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性。结果所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确。IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性。结论成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在*** BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白。