松材线虫galectin-1基因的克隆、原核表达和表达模式分析
Cloning,prokaryotic expression and expression pattern analysis profiling of the galectin-1 gene of in the pine wood nematode,Bursaphelenchus xylophilus作者机构：福建农林大学植物保护学院闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福建福州350002 福建农林大学植物保护学院福建省昆虫生态重点实验室福建福州350002 中国科学院动物研究所农业虫鼠害综合治理研究国家重点实验室北京100101 中国科学院生物互作卓越创新中心北京100049
出 版 物：《生物安全学报》 (Journal of biosafety)
年 卷 期：2020年第29卷第2期
页 面：99-105,122页
基 金：中国科学院前沿科学重点研究项目(QYZDB-SSW-SMC014) 国家自然科学基金面上项目(31572272)
主 题：松材线虫 半乳糖凝集素-1基因 原核表达 RT-qPCR
摘 要：【目的】galectin-1是凝集素的一种,广泛存在于各种生物体内,在生长发育、免疫调节方面起重要作用。本研究克隆和表达了松材线虫的galectin-1蛋白,并分析了各个龄期的表达量。【方法】设计引物,扩增松材线虫的galectin-1基因,使用双酶切的方法连接pET-28a载体和目的基因,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆;在不同温度下,用不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检验蛋白表达情况;采用RT-PCR技术检验松材线虫各个龄期galectin-1基因的表达情况。【结果】由SMART和PredictProtein软件分析可知,该蛋白有2个结构域,并且主要由无规卷曲和β折叠构成;生物学信息分析显示,松材线虫的galectin-1与小卷蛾斯氏线虫的相似性更高;与日本血吸虫相比,线虫能很好地聚集在一个分支上。Western blot检测纯化蛋白大小与查询所得蛋白分子质量一致。RT-qPCR结果显示,以繁殖型2龄松材线虫(L 2)为对照,galectin-1基因在繁殖型3龄(L 3)、繁殖型4龄(L 4)、扩散型3龄(LⅢ)和扩散型4龄(LⅣ)松材线虫中的表达量高,尤其是在LⅢ中的表达量最高;雌雄成虫没有显著性差异。【结论】松材线虫的galectin-1基因在pET-28a原核表达系统中呈可溶性表达,在不同龄期的表达量有差异。本研究为进一步研究松材线虫的galectin-1基因奠定了基础,为松材线虫的防治提供了新的方向。
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