红花cDNA相关序列扩增多态性的扩增体系优化

作     者：唐洁 李亚葵 王章建 郭美丽 TANG Jie;LI Ya-kui;WANG Zhang-jian;GUO Mei-li

作者机构：第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 山西农业大学生命科学院太谷030801 

出 版 物：《药学服务与研究》 (Pharmaceutical Care and Research)

年 卷 期：2009年第9卷第5期

页      面：348-351页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(No.30772734) 

主　　题：红花 cDNA 相关序列扩增多态性 分子标记 逆转录聚合酶链反应 

摘      要：目的:建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性(SRAP)扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法:提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷(dNTPs)、引物的反应浓度。随后设计Mg2+的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果:本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为:25μL反应体系中含模板cDNA 20 ng,1×PCR缓冲液2.5 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.04 U/μL,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论:该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。