蓝圆鲹分离蛋白水溶性蛋白酶的鉴定及性质

作     者：林怡晨 刘伟峰 孙小舒 张凌晶 翁凌 曹敏杰 孙乐常 LIN Yichen;LIU Weifeng;SUN Xiaoshu;ZHANG Lingjing;WENG Ling;CAO Minjie;SUN Lechang

作者机构：集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心福建厦门361021 福建省海洋功能食品工程技术研究中心福建厦门361021 

出 版 物：《集美大学学报（自然科学版）》 (Journal of Jimei University：Natural Science)

年 卷 期：2020年第25卷第2期

页      面：97-104页

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083204[工学-水产品加工及贮藏工程] 

基　　金：福建省自然科学基金项目(2017J05053) 集美大学黄慧贞基金项目(ZC2014009) 国家级大学生创新创业项目(201810390023) 

主　　题：蓝圆鲹 等电点沉淀法 凝胶劣化 丝氨酸蛋白酶 

摘      要：以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)为研究对象,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),分析比较不同分离蛋白与肌肉全蛋白(total protein,TP)的自身降解规律,并对其水溶性蛋白酶的酶学性质展开研究。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果显示,TP与KPI均会发生强烈的自身降解现象,API则无明显的自身降解。酶谱与酶活力测定结果表明,KPI保留了TP超过80%的酶活性,而API则仅剩10%的水解活性。酶学性质结果表明,TP的内源酶具有两个最适pH值,分别为3.0与9.0,而KPI的最适pH值为9.0;TP与KPI内源酶的最适温度均为60℃。荧光底物结果表明,TP与KPI的最适荧光底物为Boc-Gln-Arg-Arg-MCA,且对羧基端为Arg的底物均具有较高的水解活性。抑制剂结果显示,TP和KPI水溶性蛋白酶都能被丝氨酸蛋白酶抑制剂强烈抑制,暗示水溶性丝氨酸蛋白酶在碱法等电点制备的分离蛋白凝胶劣化中起关键作用。