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等电点沉淀法提取牡蛎蛋白及其蛋白组成分析

渔业研究 2019年第2期41卷 106-112页

作者：姜燕蓉张亚飞齐筱莹王丹妮田茂鸿赵慧大连海洋大学食品科学与工程学院辽宁大连116623

本文采用等电点沉淀法对牡蛎蛋白的提取工艺进行优化后,对牡蛎中各蛋白组分的构成进行了分析,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量的分布。结果表明,在室温、溶解pH 12.0、提取时间1.0 h、酸沉pH 4.0条件下,蛋白提取率为6... 详细信息

本文采用等电点沉淀法对牡蛎蛋白的提取工艺进行优化后,对牡蛎中各蛋白组分的构成进行了分析,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量的分布。结果表明,在室温、溶解pH 12.0、提取时间1.0 h、酸沉pH 4.0条件下,蛋白提取率为65.6%,纯度为84.3%。牡蛎蛋白中盐溶性蛋白含量最高,其后依次是碱溶性蛋白、水溶性蛋白和醇溶性蛋白。SDS-PAGE电泳图谱显示,经过β-巯基乙醇(变性电泳)和未经β-巯基乙醇(非变性电泳)处理的样品中,等电点沉淀法制备的蛋白样品分别在44.3和97.2 kDa处出现明显条带;盐溶性蛋白分别在44.3和20.1 kDa出现明显条带;水溶性蛋白条带分散;碱溶性蛋白分子电泳条带分布较宽,主要在200.0和50.0 kDa以下;醇溶性蛋白仅在44.3 kDa处有一条带。

关键词：牡蛎等电点沉淀法蛋白组分分子量分布

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等电点沉淀法分离毛发水解物L-酪氨酸

广州化学 1989年第4期14卷 63-65页

作者：郑淑贞崔云春林慧贞

本文叙述了以毛发水解液为起始原料,利用等电点沉淀法,在不影响提取L-胱氨酸的同时,提取了L-酪氨酸的工艺过程。得率为0.45％,产品质量达到日本药典标准。

关键词：酪氨酸毛发水解液等电点沉淀法

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低温等电点沉淀法提取头发中的L-精氨酸

吉首大学学报（自然科学版） 2007年第4期28卷 107-110页

作者：石爱华李志平欧阳玉祝尹刚明吉首大学化学化工学院湖南吉首416000

用低温等电点沉淀法对头发中L-精氨酸的提取工艺条件进行了研究,考查了头发水解条件、沉淀剂的种类及用量、pH值、氯离子浓度、提取温度等因素对L-精氨酸产量的影响.实验结果表明:在pH值10、温度0℃,氯离子浓度为2.1 mol/L2、mL苯甲醛... 详细信息

用低温等电点沉淀法对头发中L-精氨酸的提取工艺条件进行了研究,考查了头发水解条件、沉淀剂的种类及用量、pH值、氯离子浓度、提取温度等因素对L-精氨酸产量的影响.实验结果表明:在pH值10、温度0℃,氯离子浓度为2.1 mol/L2、mL苯甲醛作沉淀剂时,30 mL头发水解液中L-精氨酸的产量为0.139 g.

关键词： L-精氨酸等电点沉淀法头发

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优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺

精细化工 2019年第5期36卷 850-855,874页

作者：刘雯恩周艳芳范志强李玉玲甘兵彭新生广东医科大学药学院广东东莞523808 生物医药产业化协同创新中心广东东莞523808 广东医科大学海洋医药研究院广东湛江524023 广东医科大学第三附属医院广东佛山528000

使用0.5 mol/L乙酸和胃蛋白酶提取Ⅰ型胶原蛋白后,结合等电点沉淀法和超滤纯化技术对Ⅰ型胶原蛋白进行纯化。通过鞣酸沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实等电点沉淀可有效除去胃蛋白酶;经超滤纯化后的胶原蛋白紫外光谱检测在235n... 详细信息

使用0.5 mol/L乙酸和胃蛋白酶提取Ⅰ型胶原蛋白后,结合等电点沉淀法和超滤纯化技术对Ⅰ型胶原蛋白进行纯化。通过鞣酸沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实等电点沉淀可有效除去胃蛋白酶;经超滤纯化后的胶原蛋白紫外光谱检测在235nm处有最大吸收峰;在SDS-PAGE谱图上出现3条Ⅰ型胶原蛋白特征谱带;采用凯氏定氮法也证实其纯度符合YY/T1511—2017医药行业标准;通过傅里叶变换红外光谱、圆二色谱法(Circular Dichroism, CD)测定证实胶原蛋白三螺旋结构被完整保留下来。采用等电点沉淀法结合超滤纯化技术,可保证Ⅰ型胶原蛋白的高纯度及三螺旋结构的完整性。

关键词：型胶原蛋白等电点沉淀法超滤纯化圆二色谱法生物工程

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米糠脂多糖提取物中分离蛋白质的研究

中国粮油学报 2000年第5期15卷 6-9页

作者：陈正行无锡轻工大学食品学院无锡214036

米糠是富含植物脂多糖的植物资源。本文就米糠脂多糖制备过程中 ,蛋白与脂多糖的分离方法进行了研究。结果表明 ,等电点沉淀法和超滤法的串联应用可充分发挥两者的分离特点。

关键词：米糖脂多糖蛋白质分离等电点沉淀法超滤法

酪蛋白沉淀测定方法在市售纯牛乳中的应用与验证

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食品科技 2014年第7期39卷 290-292,299页

作者：魏莉娟孙雯成霈徐忠李宏梁西安产品质量监督检验院西安710065 陕西科技大学生命科学与工程学院西安710021

为了改进乳品中蛋白质含量的测定方法,在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,增加了NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物,结合凯氏定氮法对2种市售纯牛乳中的乳蛋白组分进行了测定。实验结果表明,酪蛋白质量分数约为61%,酪蛋白和乳清蛋白相... 详细信息

为了改进乳品中蛋白质含量的测定方法,在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,增加了NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物,结合凯氏定氮法对2种市售纯牛乳中的乳蛋白组分进行了测定。实验结果表明,酪蛋白质量分数约为61%,酪蛋白和乳清蛋白相加得到的理论蛋白质含量与实际测定的总蛋白质质量分数误差不超过1.38%,改进后的等电点沉淀分离结合凯氏定氮法高效准确,重现性好,可以用于纯牛乳中酪蛋白的掺假鉴定。

关键词：牛乳掺假酪蛋白等电点沉淀法凯氏定氮法

等电点沉淀结合凯氏定氮法测定市售纯牛奶中酪蛋白的含量

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食品研究与开发 2014年第15期35卷 90-93页

作者：孙雯李宏梁魏莉娟曹吉利谭源惠笑陕西科技大学生命科学与工程学院陕西西安710021 西安产品质量监督检验院陕西西安710065 西安东方乳业有限公司陕西西安710028

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后... 详细信息

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后的等电点沉淀方法,测定酪蛋白质量分数都在74%~76%。pH4.6HAc-NaAc缓冲溶液作为洗涤剂,对于体系pH的维持更加稳定。仅沉淀的处理方式可以将大部分乳清蛋白和酪蛋白进行分离。NaOH溶液最佳添加范围是25mL^35mL。改进后的等电点沉淀结合凯氏定氮法高效准确,简单易行,重现性好,可以用于纯牛奶中酪蛋白的掺假鉴定。

关键词：牛乳掺假碱复溶酪蛋白等电点沉淀法凯氏定氮法

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酪蛋白质量分数作为乳品掺假检验指标的探讨

中国乳品工业 2008年第1期36卷 52-54,62页

作者：李宏梁黄峻榕李红吴小勇刘树兴陕西科技大学生命科学与工程学院西安710021 咸阳市产品质量监督检验所陕西咸阳712000

论述了我国乳品掺假的原因、方式和危害,以及掺假鉴定的必要性和重要性,分析了酪蛋白是牛乳中的特征性成分,根据乳品中酪蛋白占乳蛋白的质量比例(即酪蛋白质量分数)一般会稳定在77%～78%左右,提出了酪蛋白质量分数≥73%,可以作为乳品掺... 详细信息

论述了我国乳品掺假的原因、方式和危害,以及掺假鉴定的必要性和重要性,分析了酪蛋白是牛乳中的特征性成分,根据乳品中酪蛋白占乳蛋白的质量比例(即酪蛋白质量分数)一般会稳定在77%～78%左右,提出了酪蛋白质量分数≥73%,可以作为乳品掺假检验的定量指标,探讨了国内外酪蛋白定量检测方法的研究现状。结果表明,等电点沉淀法无疑是一种适合我国国情的、操作简单的酪蛋白检验方法,对防治乳品掺假具有重要的现实意义,并通过分析提出了该检验方法所需研究的内容。

关键词：牛乳掺假酪蛋白等电点沉淀法检验

鱿鱼（Todarodes Pacificus）内脏自溶液的体外抗氧活性及内源性蛋白酶的提取和应用

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鱿鱼（Todarodes Pacificus）内脏自溶液的体外抗氧活性及内源性...

作者：张开强浙江海洋大学

学位级别：硕士

鱿鱼内脏是鱿鱼加工过程中产生的主要副产物,占整个鱼体湿重的15%左右。大型鱿鱼加工企业对鱿鱼内脏处理方式为制成鱿溶浆后低价出售,而小型加工企业普遍处理方式为就地掩埋。这些处理方式不仅未充分挖掘出鱿鱼内脏的经济价值,而且也不... 详细信息

鱿鱼内脏是鱿鱼加工过程中产生的主要副产物,占整个鱼体湿重的15%左右。大型鱿鱼加工企业对鱿鱼内脏处理方式为制成鱿溶浆后低价出售,而小型加工企业普遍处理方式为就地掩埋。这些处理方式不仅未充分挖掘出鱿鱼内脏的经济价值,而且也不利于当地生态环境,不符合我国可持续发展战略。本论文针对鱿鱼内脏开发利用现状,在前期完成鱿鱼内脏抗氧化型自溶液(SVAs)的基础上,主要开展以下研究:(1)鱿鱼内脏自溶液的营养评价以及体外抗氧化活性研究;(2)利用常见的分离纯化技术方法,提取鉴定了鱿鱼内脏自溶液抗氧化肽,并分析了各个肽段的抗氧化活性;(3)研究了利用ISP法提取鱿鱼内脏蛋白酶的最优条件,并通过质谱技术对获得的蛋白酶进行了鉴定;(4)对鱿鱼内脏蛋白酶的部分理化性质进行了研究,包括酶的最适温度和最适pH,酶对温度、pH以及盐度的耐受性;同时,利用鱿鱼内脏蛋白酶水解黄鲫鱼鱼肉蛋白,分析了水解液的体外抗氧化活性。鱿鱼内脏自溶液的营养评价说明SVAs的蛋白提取率和可溶性肽含量高,达到了78.47%,氨基酸组成合理,含量最高的氨基酸为谷氨酸,达到了37.18 mg/g,第一限制氨基酸是蛋氨酸+半胱氨酸,其余必需氨基酸含量均高于FAO/WHO的推荐值。SVAs的体外DPPH自由基和羟自由基清除能力以及还原力要强于同浓度的L-肌肽,有进一步开发为功能型风味肽的应用前景。采用Sephadex G25凝胶层析和RP-HPLC分离对SVAs进行分离纯化,其中凝胶过滤层析得到SVAs 1,SVAs 2,SVAs 3和SVAs 4组分,其中SVAs 3的体外抗氧化活性最好;通过LC-ESI-MS/MS技术从SVAs3中鉴定得到六条抗氧化肽SVAs3-Ⅰ(LLAPPER)、SVAs3-Ⅱ(FPGLADR)、SVAs3-Ⅲ(WVAPLK),SVAs3-Ⅳ(FFNPVH),SVAs3-Ⅴ(FNVVLK)、SVAs3-Ⅵ(LELPLK)。化学合成的上述六条肽均显示了一定的体外抗氧化活性,其中SVAs3-Ⅳ和SVAs3-Ⅴ对DPPH自由基清除效果最强,SVAs3-Ⅲ和SVAs3-Ⅳ的清除羟自由基的效果最好,而SVAs3-Ⅳ的还原力最高。采用ISP法提取鱿鱼内脏蛋白酶,确定ISP法提取鱿鱼内脏蛋白酶的最佳pH为3.0,经超滤后酶活达到1.06 U/mL,比酶活达到8.83 U/mg,与粗酶液相比,纯化了3.96倍,蛋白回收率为54.55%。SDS-PAGE显示纯化的酶液中至少含有两种蛋白,分子量分别为45 kDa和28.06 kDa,而酶谱图显示纯化的酶液至少含有一种蛋白酶,分子量为45 kDa;UPLC-ESI-MS/MS表明,提取的鱿鱼内脏蛋白酶为组织蛋白酶D[Todarodes Pacificus],分子量为42.748 kDa。对鱿鱼内脏蛋白酶的理化性质研究表明,鱿鱼内脏蛋白酶的最适温度为60℃,最佳pH为3.00,该酶在300℃,pH 1.0.0范围内酶活性稳定。此外,该酶在NaCl浓度为8%时孵育60 min后,其酶活保持80%以上,具有较好的耐盐性。将鱿鱼内脏蛋白酶用于水解黄鲫鱼,结果表明:当黄鲫鱼水解液的水解度为8.63%时,其DPPH自由基清除率达到100%,当水解度为15%时,黄鲫鱼水解液的羟自由基清除率达到83.69%,还原力为0.78。因此,鱿鱼内脏蛋白酶可用于功能型水产蛋白水解液的制备,有进一步开发利用价值。

关键词：鱿鱼内脏自溶液抗氧化肽蛋白酶等电点沉淀法