miR-1293促进非小细胞肺癌耐药分子机制探讨

作     者：刘炜 尤青海 方浩徽 牛华 LIU Wei;YOU Qing-hai;FANG Hao-hui;NIU Hua

作者机构：安徽医科大学第一附属医院呼吸与危重症科安徽合肥230000 安徽省胸科医院呼吸二科安徽合肥230000 

出 版 物：《中华肿瘤防治杂志》 (Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment)

年 卷 期：2020年第27卷第4期

页      面：256-261页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：miR-1293 RUNX3 Akt 非小细胞肺癌 耐药 

摘      要：目的microRNA与非小细胞肺癌耐药性密切相关,但miR-1293在非小细胞肺癌中的作用机制仍不清楚。本研究探讨miR-1293调控Akt信号通路促进非小细胞肺癌耐药的分子机制。方法培养人肺癌A549与耐药细胞株A549/DDP,RT-qPCR检测miR-1293和抑癌基因RUNX3 mRNA表达,蛋白质印迹检测RUNX3蛋白表达。采用脂质体法将miR-1293抑制物(miR-1293inhibitor)和阴性对照RNA(miR-NC)转染A549/DDP。MTT检测细胞IC50;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2和RUNX3;荧光素酶报告基因检测miR-1293能否调控RUNX3;qPCR检测miR-1293和RUNX3的mRNA表达;蛋白质印迹检测MDR1/ABCB1、ABCC1、RUNX3、Akt和p-Akt蛋白表达。结果A549/DDP细胞对DDP的耐药指数为7.23。miR-1293在耐药细胞株A549/DDP的表达(3.89±0.08,W=0.946,P=0.698)与A549组(1.01±0.05,W=0.938,P=0.622)相比升高,差异有统计学意义,t=74.78,P0.001;而RUNX3 mRNA和RUNX3蛋白在耐药细胞株A549/DDP的表达与A549组相比降低,tmRNA=7.74,t蛋白=20.04,均P0.001。与miR-NC比较,miR-1293 inhibitor组IC50降低,t=94.49,P0.001。miR-1293 inhibitor组MDR1/ABCB1、ABCC1蛋白表达低于miR-NC,tMDR1/ABCB1=10.61,tABCC1=39.57,均P0.001。与miR-NC比较,miR-1293 inhibitor组细胞凋亡增加,t=7.15,P0.001。促凋亡蛋白RUNX3在miR-1293 inhibitor组表达更高,t=33.63,P0.001;凋亡抑制蛋白Bcl-2表达更低,t=11.62,P0.001。荧光素酶报告实验显示,在野生型RUNX33′UTR中,miR-1293 inhibitor的荧光素酶活性(6.24±0.04,W=0.911,P=0.399)高于miR-NC(3.21±0.07,W=0.879,P=0.221),t=92.06,P0.001;提示RUNX3是miR-1293靶基因。miR-1293 inhibitor组RUNX3蛋白表达高于miR-NC,t=17.75,P0.001;Akt1、p-Akt低于miR-NC组,tAkt1=67.55,tp-Akt=16.98,均P0.001。结论在耐药细胞株A549/DDP中miR-1293高表达,抑制细胞凋亡,促进细胞耐药,其机制可能与靶向下调RUNX3,促进Akt信号通路激活有关。