c-erbB-2癌基因特异性核酶的体外切割作用

作     者：毕锋 张学庸 樊代明 惠宏襄 王成济 

作者机构：第四军医大学西京医院全军消化疾病研究所 第四军医大学生化及分子生物学教研室 

出 版 物：《中华肿瘤杂志》 (Chinese Journal of Oncology)

年 卷 期：1999年第21卷第1期

页      面：7-9页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金 

主　　题：c-erbB-2 核酶 基因治疗 原癌基因 mRNA 肿瘤 

摘      要：目的构建ｃｅｒｂＢ２特异性核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）基因及其底物基因的体外转录载体并探讨其体外切割作用。方法在计算机设计的核酶ＲＺ１基因的３′端加上新的限制性酶切位点ＥｃｏＲＶ，先合成ＲＺ１基因并将之与其底物分别克隆入体外转录载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－），经用ＥｃｏＲＶ快速初选出含有ＲＥ１基因重组子并测序鉴定。体外转录物用３２Ｐ标记。体外切割作用在Ｍｇ＋＋的存在下，３７℃反应１小时，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影后经图像分析计算出切割率。结果用ＥｃｏＲＶ筛选很快鉴定出了含有ＲＥ基因的重组子并命名为ｐＧＥＭ３ＺＲＺ１，自动测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的Ｔ７启动子。ＲＺ１的靶基因片段也被插入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的ＳＰ６启动子下。经体外转录出核酶ＲＺ１及靶ＲＮＡ后，体外切割反应１小时，７９．３％的靶ＲＮＡ即被切开。结论ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１在体外有良好的切割活性，该实验为进一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。