鸡γ干扰素与补体C3d主要片段的串联表达及活性测定

作     者：牛明福 范逸文 杜梦璇 鲍永毅 宫强 侯颖 NIU Ming-Fu;FAN Yi-Wen;DU Meng-Xuan;BAO Yong-Yi;GONG Qiang;HOU Ying

作者机构：河南科技大学食品与生物工程学院/河南省食品微生物生物工程技术中心洛阳471023 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2020年第36卷第6期

页      面：662-666页

核心收录：

学科分类：0907[农学-林学] 090705[农学-野生动植物保护与利用] 09[农学] 

基　　金：河南省重点科技攻关项目(172102310327) 河南省产学研项目(2014HNCXY008)资助 

主　　题：鸡γ-干扰素 补体C3d 原核表达 抗病毒活性 免疫佐剂 

摘      要：目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂。方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。将重组蛋白纯化后进行鸡胚内抗新城疫病毒活性研究;并与DNA疫苗共同免疫雏鸡,HI法测定抗体水平,MTT法测定淋巴细胞增殖情况,并分析免疫器官指数变化。结果:成功表达纯化了chIFN-γ和chIFN-γ-C3d两个蛋白,SDS-PAGE电泳检测分子量分别约为17 kD和21 kD,His标签抗体检测表明蛋白表达正确。鸡胚内抗病毒活性测定表明一定浓度的chIFN-γ和chIFN-γ-C3d均可以抑制新城疫病毒的增殖,低浓度时chIFN-γ-C3d抗病毒活性高于chIFN-γ;与DNA疫苗联合免疫后,HA组、γ+HA和γ+C+HA组抗体水平持续升高,且与HA组相比,γ+C+HA组抗体水平更高,差异有极显著统计学意义(P0.01)。第7周开始γ+C+HA组的抗体水平均高于γ+HA组,差异有极显著统计学意义(P0.01)。HA、γ+HA和γ+c+HA组淋巴细胞均显示出较高的增殖活性,且γ+c-HA组增殖活性更高,与HA组差异有极显著统计学意义(P0.01),与γ+HA相比差异有显著统计学意义(P0.05),说明chIFN-γ-C3d、chIFN-γ都具有促进淋巴细胞增殖的作用,并且chIFN-γ-C3d比chIFN-γ作用更强,差异有显著统计学意义(P0.05)。第9周时,γ+C+HA组胸腺指数和法氏囊指数都高于其他组,与γ+HA组相比差异有极显著统计学意义(P0.01)。结论:实验表明,相比于单独的DNA疫苗,chIFN-γ-C3d或chIFN-γ与DNA疫苗联合免疫具有更强的免疫效果,chIFN-γ-C3d比单独的chIFN-γ效果更好,可作为一种新的免疫佐剂应用于DNA疫苗的免疫。