视黄酸依赖反义cyclinD1 RNA表达载体的构建与鉴定

作     者：杨剑 糜漫天 杨志祥 韦娜 

作者机构：第三军医大学预防医学系营养卫生学教研室重庆400038 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2004年第20卷第1期

页      面：20-23,26页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (30 0 70 32 8) 

主　　题：CyclinDl 视黄酸 反义 

摘      要：目的 构建人细胞周期素D1(CyclinD1)基因的视黄酸 (Retinoicacid ,RA)依赖反义RNA表达载体 ,为进一步在细胞内应用视黄酸诱导其表达从而发挥效应的肿瘤基因治疗奠定基础。方法 运用DNA重组技术构建含有RARE3 TK启动子的反义cyclinD1RNA真核表达载体 (pCI neo RARE3 TK AScyclinD1) ,经酶切、PCR以及DNA测序确认后 ,用脂质体方法转染HL 6 0细胞 (人早幼粒白血病细胞系 ) ,RA处理后 ,利用免疫组织化学方法检测细胞内靶基因cyclinD1的表达情况。结果 成功构建重组反义cyclinD1RNA表达载体 ,与预期设计路线相符 ;检测DNA序列与原始片段互补 ,且方向相反。ATRA处理转染和未转染HL 6 0细胞后 ,cyclinD1的表达均有所下降 ,其中转染组细胞的表达量要明显低于未转染组。结论 本实验成功构建了视黄酸依赖反义cyclinD1RNA表达载体 ;转染HL 6 0细胞后 ,反义cyclinD1的表达可受到RA的诱导调控。