嗜酸乳杆菌ATCC4356 S-层蛋白的克隆、表达和纯化

作     者：孙琴 曾乃燕 周爱武 叶玮 SUN Qin;ZENG Nai-yan;ZHOU Ai-wu;YE Wei

作者机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防儿童科上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025 

出 版 物：《上海交通大学学报（医学版）》 (Journal of Shanghai Jiao tong University:Medical Science)

年 卷 期：2014年第34卷第6期

页      面：946-950页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：上海第九人民医院院级基金(院2012-04)~~ 

主　　题：嗜酸乳杆菌ATCC4356 S-层蛋白 克隆 表达 纯化 

摘      要：目的克隆嗜酸乳杆菌S层蛋白的编码基因,使其原核表达并纯化表达产物。方法对嗜酸乳杆菌S层蛋白(S-layer protein)基因进行提取和扩增,连接pET-SUMO3表达载体并转入大肠杆菌内使其表达;采用镍柱亲和层析技术对S层蛋白进行提取及纯化,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting验证表达产物。结果嗜酸乳杆菌ATCC4356的S层蛋白编码基因(1 263 bp)被克隆,且与相关基因有98%同源性。SDS-PAGE及Western blotting证明,重组融合蛋白在细菌中能够高效表达且部分融合蛋白可经亲和层析及酶切去除融合标签获得重组S-层蛋白(43 0000 Da)。结论通过获得嗜酸乳杆菌S-层蛋白编码基因的方法可实现其原核表达,并得到纯度较高的S层蛋白,为后续的生物学功能研究奠定了基础。