检索结果-南通市图书馆

上海交通大学学报（医学版） 2014年第6期34卷 946-950页

作者：孙琴曾乃燕周爱武叶玮上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防儿童科上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025

目的克隆嗜酸乳杆菌S层蛋白的编码基因,使其原核表达并纯化表达产物。方法对嗜酸乳杆菌S层蛋白(S-layer protein)基因进行提取和扩增,连接pET-SUMO3表达载体并转入大肠杆菌内使其表达;采用镍柱亲和层析技术对S层蛋白进行提取及纯化,经SD... 详细信息

目的克隆嗜酸乳杆菌S层蛋白的编码基因,使其原核表达并纯化表达产物。方法对嗜酸乳杆菌S层蛋白(S-layer protein)基因进行提取和扩增,连接pET-SUMO3表达载体并转入大肠杆菌内使其表达;采用镍柱亲和层析技术对S层蛋白进行提取及纯化,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting验证表达产物。结果嗜酸乳杆菌atcc4356的S层蛋白编码基因(1 263 bp)被克隆,且与相关基因有98%同源性。SDS-PAGE及Western blotting证明,重组融合蛋白在细菌中能够高效表达且部分融合蛋白可经亲和层析及酶切去除融合标签获得重组S-层蛋白(43 0000 Da)。结论通过获得嗜酸乳杆菌S-层蛋白编码基因的方法可实现其原核表达,并得到纯度较高的S层蛋白,为后续的生物学功能研究奠定了基础。

关键词：嗜酸乳杆菌atcc4356 S-层蛋白克隆表达纯化

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组嗜酸乳杆菌S层蛋白拮抗H_9N_2禽流感病毒对树突状细胞侵袭的研究

引用

南京农业大学学报 2017年第5期40卷 881-887页

作者：高雪朱立麒栗云云吴海琴朱怡蕾庾庆华南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]乳酸杆菌S层蛋白可结合树突状细胞特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)受体调节树突状细胞的成熟和分化,禽流感病毒同样可以通过与DC-SIGN的结合促进病毒在人源树突状细胞内的复制。为了探究S层蛋白是否竞争性与DC-S... 详细信息

[目的]乳酸杆菌S层蛋白可结合树突状细胞特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)受体调节树突状细胞的成熟和分化,禽流感病毒同样可以通过与DC-SIGN的结合促进病毒在人源树突状细胞内的复制。为了探究S层蛋白是否竞争性与DC-SIGN结合,进而拮抗禽流感病毒侵袭树突状细胞,本试验构建表达嗜酸乳杆菌atcc4356 S层蛋白的重组大肠杆菌,并探究重组S层蛋白抑制H9N2禽流感病毒侵袭树突状细胞的影响。[方法]以嗜酸乳杆菌atcc4356的基因组为模板扩增S层蛋白基因并携带GST标签,构建重组质粒p GEX-4t-2-S并转化*** Rosetta-gami2(DE3),18℃低温诱导重组S层蛋白的表达,提取S层蛋白后经亲和层析进一步纯化;用纯化的重组S层蛋白提前作用于小鼠和鸡骨髓源树突状细胞,随后感染H9N2禽流感病毒,检测S层蛋白对禽流感病毒感染的拮抗作用。[结果]电泳结果显示成功扩增出1 295 bp的带有同源臂的嗜酸乳杆菌atcc4356 S层蛋白基因;酶切得到2条带,分别为载体骨架4 951 bp,目的基因1 263 bp,表示成功构建p GEX-4t-2-S质粒,并且测序结果正确;电泳结果显示转化子中带有S层蛋白的基因,表明构建的质粒成功转入到DE3中并成功表达;电泳结果显示在相对分子质量70×103处有1条带,灰度分析表明亲和层析纯化后得到了纯度为95%的重组S层蛋白,产量为每1011CFU大肠杆菌11.9 mg;流式细胞检测结果证明S层蛋白能够使入侵小鼠和鸡树突状细胞中的H9N2病毒量减少25%~30%,实时荧光定量PCR结果表明HA、NA、NP和PB1基因的相对表达水平均达20%以上。[结论]重组大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)表达的S层蛋白能够有效地拮抗H9N2亚型禽流感病毒对小鼠和鸡树突状细胞的侵袭,为预防禽流感疫病提供新思路。

关键词：嗜酸乳杆菌atcc4356 S层蛋白树突状细胞禽流感病毒

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

嗜酸乳杆菌调控Wnt/β-catenin信号通路维护肠黏膜屏障机制的研究

嗜酸乳杆菌调控Wnt/β-catenin信号通路维护肠黏膜屏障机制的研究

引用

作者：叶露露南京农业大学

学位级别：硕士

肠黏膜屏障由黏膜上皮细胞、肠道正常微生物群等环节组成,不仅能保障营养物质的高效吸收,而且可通过不断更新脱落的肠上皮以阻挡外界环境。肠黏膜依靠肠道隐窝处的干细胞持续增殖和分化来替代损伤脱落的肠上皮以维持肠道稳态。然而肠上... 详细信息

肠黏膜屏障由黏膜上皮细胞、肠道正常微生物群等环节组成,不仅能保障营养物质的高效吸收,而且可通过不断更新脱落的肠上皮以阻挡外界环境。肠黏膜依靠肠道隐窝处的干细胞持续增殖和分化来替代损伤脱落的肠上皮以维持肠道稳态。然而肠上皮不断受到微生物的刺激,打破肠道稳态,诱发肠道炎症。沙门氏菌是养殖业中最常见的致病菌群之一,导致严重腹泻的肠道炎症,给养殖业带来巨大的经济损失。随着益生菌的研究和应用不断深入,越来越多的研究者证实乳酸杆菌能有效抵抗病原菌的入侵和感染。然而,由于复杂的体内环境,以及缺乏适宜的研究模型,故乳酸杆菌抵抗病原菌维护肠上皮屏障完整的机制尚未明确,为了明确这一机制,本次试验通过肠类器官模型并结合动物试验,探讨嗜酸乳杆菌调控Wnt/β-catenin途径修复沙门氏菌损伤的黏膜屏障机理。本研究首先分组为空白对照组、嗜酸乳杆菌atcc4356组和嗜酸乳杆菌保护组,然后利用沙门氏菌SL1344成功构造了肠炎模型。实验研究的内容主要有以下三个部分:1嗜酸乳杆菌调控wnt/β-catenin稳定肠上皮细胞的增殖减缓肠黏膜损伤嗜酸乳杆菌在肠道免疫和对病原菌的拮抗作用中起着日益重要的作用。为了探究嗜酸乳杆菌对病原菌引起的肠黏膜损伤的修复作用,本次试验选用四周龄的C57BL/6小鼠为研究对象,连续饲喂嗜酸乳杆菌(1×108CFU)一个月后,感染沙门氏菌(1×107CFU)发现沙门氏菌引起小鼠严重死亡,肠道组织形态(HE)损伤,肠绒毛出血,萎缩,肠隐窝增生PCNA+(干细胞过渡增殖区域)。免疫英光检测了小鼠肠道分泌型细胞(潘式细胞UEA-1+、杯状细胞Lysozyme+、tuft细胞DCLK1+)的数量,结果发现:沙门氏菌入侵感染小鼠肠道,肠上皮的分泌型细胞扩增。而嗜酸乳杆菌保护组的小鼠感染沙门氏菌后的各项指标:存活率、肠道组织病理形态、隐窝病理增生,分泌型细胞扩增都显著改善。肠上皮的增殖和分化的动力来源于隐窝处的干细胞,试验利用qPCR检测干细胞的mRNA水平,结果显示:相较于嗜酸乳杆菌保护组,单独沙门氏菌感染组的干细胞数量急剧减少,以及wnt/β-catenin信号通路的转录基因Axin2异常增高。为了进一步探究嗜酸乳杆菌对沙门氏菌感染小鼠的保护作用,通过ELISA检测发现嗜酸乳杆菌能降低肠道的炎症因子(IL-1β和TNF-α)和肠道菌载量;并发现嗜酸乳杆菌阻止沙门氏菌入侵从而减缓炎症的侵袭。TLRs是模式识别受体,首先识别病原相关分子模式(PAMPs),调节肠道的炎症反应,因此它们作为机体防御机制的重要部分。为了验证TLR在嗜酸乳杆菌的调控中的作用,试验利用荧光定量PCR检测肠道TLR表达量的变化,发现嗜酸乳杆菌能缓解沙门氏菌诱导LTR2和TLR4的高表达,调控肠道炎症,减缓沙门氏菌诱发的炎症侵袭,从而减缓隐窝处的病理增生,最终逆转干细胞(Lgr5)数量降低的命运。以上结果证明嗜酸乳杆菌能调控受损的肠道微环境,调节小鼠肠道干细胞数量和TA区的增殖速率,维持肠道更新节奏,保证细胞自身正常的调控机制。2建立嗜酸乳杆菌-肠类器官-沙门氏菌的体外共培养模型肠类器官模型是一种三维细胞培养系统,可以在体外稳定培养形成具有隐窝-绒毛结构与体内来源的肠道组织结构高度相似。肠类器官具有肠干细胞,可以复制分化不同的细胞类型:吸收型细胞、分泌型细胞,并在基质胶的支持下有利于肠类器官空间的延展和长期培养。本试验使用EDTA分离小鼠肠道隐窝,肠隐窝是小肠干细胞的栖息地。在原代的培养过程中,我们将获取的细胞培养在一个支持介质(基质胶Matrigel)上,使其能够维持三维生长。为了肠类器官后期的长期培养和稳定传代,细胞的生长培养基中添加了 500 ng/ml R-spondin,100 ng/ml Noggin 和 50 ng/mLEGF,提供干细胞在体内微环境所需要的信号和刺激。本试验利用含有绒毛结构的成熟肠类器官探究嗜酸乳杆菌抵抗病原菌感染的机制。首先分离和培养肠类器官,其次建立嗜酸乳杆菌-肠类器官-沙门氏菌的共培养体系:预先在上清中加入嗜酸乳杆菌atcc4356(1×108CFU)孵育12h。随后打散隐窝细胞团,加入沙门氏菌SL1344(1×107CFU)并感染1h使其充分入侵细胞的游离部分,1h后重新将细胞与基质胶混合并铺板与24孔中培养24h。结果发现沙门氏菌感染的肠类器官的成芽率降低,中间黑色阴影面积增大,表明细胞的死亡,而嗜酸乳杆菌保护组的肠类器官形态显著改善,成芽率提高和阴影面积降低。这是首次建立嗜酸乳杆菌-肠类器官-沙门氏菌体外模型。3嗜酸乳杆菌调控wnt/β-catenin信号通路稳定细胞的增殖减缓肠类器官的损伤为了进一步证实体内的结果,本试验利用肠类器官的模型,模拟体内复杂的环境,将沙门氏菌感染小鼠肠类器官1h后,将感染后的细胞重新用基质胶铺板,

关键词：肠黏膜嗜酸乳杆菌atcc4356 沙门氏菌SL1344 肠类器官 wnt/β-catenin

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

乳酸菌作为宿主系统的可行性研究

引用

东北农业大学学报 2005年第4期36卷 494-497页

作者：赵振奥许袖邓凯波唐丽杰李一经东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

通过生理、生化特性,抗生素敏感性,转化实验及质粒的提取和鉴定等实验,对嗜酸乳杆菌atcc4356和乳酸乳球菌NZ9000作为宿主系统的可行性进行研究。结果表明,乳酸乳球菌NZ9000和嗜酸乳杆菌atcc4356均可作为宿主系统,表达pLP352质粒(氯霉素... 详细信息

通过生理、生化特性,抗生素敏感性,转化实验及质粒的提取和鉴定等实验,对嗜酸乳杆菌atcc4356和乳酸乳球菌NZ9000作为宿主系统的可行性进行研究。结果表明,乳酸乳球菌NZ9000和嗜酸乳杆菌atcc4356均可作为宿主系统,表达pLP352质粒(氯霉素抗性质粒,可在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭)。研究结果,在基因工程上应用抗病基因在乳酸菌中的表达奠定了基础,证实了乳酸菌作为生物安全级别的宿主系统的可行性。

关键词：嗜酸乳杆菌atcc4356 乳酸乳球菌NZ9000 宿主系统可行性研究

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：