猪博卡病毒NP1基因的克隆与原核表达

作     者：李彬 毛立 何孔旺 温立斌 茅爱华 张雪寒 倪艳秀 郭容利 马俊杰 周俊明 吕立新 俞正玉 LI Bin;MAO Li;HE Kong-wang;WEN Li-bin;MAO Ai-hua;ZHANG Xue-han;NI Yan-xiu;GUO Rong-li;MA Jun-jie;ZHOU Jun-ming;LU Li-xin;YU Zheng-yu

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2011年第26卷第3期

页      面：28-31页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31001066) 江苏省农业科技自主创新资金(cx(09)619) 国家农业公益性行业专项(200803020) 

主　　题：猪博卡病毒 NP1基因 克隆 原核表达 

摘      要：猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为46 kDa的融合蛋白,蛋白表达量较高,而且蛋白以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western Blot结果显示,表达的NP1蛋白能与His抗体发生特异性的免疫反应,表明原核表达的NP1蛋白具有良好的反应原性。