半夏曲炮制过程中微生物数量动态变化的初步分析

作     者：龙凯 王立元 郭佳佳 翁美芝 谢卫华 苏明声 杨明 谢小梅 LONG Kai;WANG Li-yuan;GUO Jia-jia;WENG Mei-zhi;XIE Wei-hua;SU Ming-sheng;YANG Ming;XIE Xiao-mei

作者机构：江西中医药大学 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2019年第25卷第24期

页      面：78-83页

核心收录：

学科分类：1005[医学-中医学] 08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 100501[医学-中医基础理论] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：国家中医药管理局2015年中医药行业科研专项(201507004-03) 

主　　题：半夏曲 发酵炮制 菌群变化 优势菌种 定量分析 荧光定量聚合酶链式反应技术 黑曲霉 

摘      要：目的:检测半夏曲炮制过程中细菌、酵母菌、霉菌的菌落数量并定量分析其中4种优势微生物数量的动态变化,为研究半夏曲炮制机制提供实验依据。方法:参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》(第十册)制备半夏曲,取半夏曲炮制过程中0,30,60,90,120 h共5个不同时间点样品,分别用选择性培养基进行细菌、霉菌、酵母菌的培养和分离纯化,并进行菌落计数;应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,宛氏拟青霉Paecilomyces variotii,丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis,黑曲霉Aspergillus niger进行绝对定量,分别以枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉重组质粒为对照品,经倍比稀释后制作标准曲线,对半夏曲炮制至5个不同时间点(0,30,60,90,120 h)样品中的4种微生物进行定量分析。结果:半夏曲炮制过程中细菌数量少且变化平缓,而酵母菌和霉菌数量至发酵后期时迅速增加,至发酵结束时均1×10^6CFU·m L^-1。枯草芽孢杆菌5个不同时间点样品中的拷贝数分别为3.53×10^5,7.56×10^4,1.58×10^5,1.90×10^6,1.85×10^6copies·g^-1;宛氏拟青霉的拷贝数为0,0,0,3.45×10^7,4.15×10^8copies·g^-1;丝衣霉菌的拷贝数为0,0,0,1.04×10^8,2.28×10^8copies·g^-1;黑曲霉的拷贝数为0,0,9.48×10^5,1.47×10^6,7.56×10^6copies·g^-1。结论:半夏曲炮制过程中微生物菌群变化趋势可以用4种优势微生物的动态变化来反映,霉菌在半夏曲炮制中可能起重要作用。荧光定量PCR技术具有快速灵敏、重复性好和特异性高的优点,适用于半夏曲的炮制机制研究。