重组羧肽酶G2的原核表达、纯化及活性分析

作     者：李树刚 王勇 张伟 辛渝 但国平 柴新娟 龚会英 于廷和 LI Shu-gang;WANG Yong;ZHANG Wei;XIN Yu;DAN Guo-ping;CHAI Xin-juan;GONG Hui-ying;YU Ting-he

作者机构：重庆科润生物医药研发有限公司重庆401121 重庆医科大学附属第二医院重庆400010 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2016年第32卷第3期

页      面：184-189页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：羧肽酶G2 原核表达 纯化 氨甲喋吟 

摘      要：在原核表达系统中实现羧肽酶G2(Carboxypeptidase G2,CPG2)的表达,并对CPG2进行了纯化和活性测定。通过PCR扩增得到编码CPG2的基因片段,利用基因重组技术构建原核表达质粒p ET-30a-CPG2,在Escherichia coli中进行诱导表达,菌体经超声破碎后利用金属螯合亲和柱和阴离子交换层析柱对目标蛋白进行纯化。目的蛋白能够以可溶形式表达,SDS-PAGE和Western blotting检测有特异的蛋白表达条带。纯化的CPG2有降解氨甲喋吟(MTX)活性,酶活力达到400 U/mg。