猪γ干扰素基因的克隆表达及其抗原性的初步研究

作     者：李林 余为一 张敬梅 刘雪兰 LI Lin;YU Wei-yi;ZHANG Jing-mei;LIU Xue-lan

作者机构：安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室合肥230036 

出 版 物：《安徽农业大学学报》 (Journal of Anhui Agricultural University)

年 卷 期：2010年第37卷第1期

页      面：32-35页

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：安徽省科技攻关项目(04013042) 安徽农业大学校长青年基金项目共同资助 

主　　题：猪γ干扰素 克隆 原核表达 抗原性 

摘      要：为研究猪γ干扰素(poIFN-γ)的生物学活性及其在机体免疫应答中的作用机理,克隆并表达了猪IFN-γ基因。首先应用RT-PCR方法通过一对自行设计的引物从猪脾脏淋巴细胞中扩增了猪γ干扰素基因片段,分别将其定向插入原核表达载体pGEX-4T-1和pET-32 a中,经测序表明与已报道的核苷酸序列同源性为100%。接着将重组质粒pGEX-poIFN-γ和pET-poIFN-γ分别转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导,得到高效表达。所表达的融合蛋白均以不溶性的包涵体形式存在,分子量分别为43.0和35.0 ku,与理论推算值相符。为研究IFN-γ在表达中结构的变化,采用上述2种融合蛋白分别作为免疫抗原和检测抗原。结果用GST-poIFN-γ免疫小鼠所诱导的抗体可与poIFN-γ产生特异性结合,表明不同原核质粒表达的猪IFN-γ仍保持其特有的结构。