慢病毒载体介导GFP标记大鼠骨髓间充质干细胞

作     者：魏峰 马爱群 王亭忠 张静 

作者机构：西安交通大学医学院第一附属医院内科学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 陕西省分子心脏病学重点实验室陕西西安710061 

出 版 物：《西安交通大学学报（医学版）》 (Journal of Xi’an Jiaotong University（Medical Sciences）)

年 卷 期：2010年第31卷第3期

页      面：288-292页

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 0703[理学-化学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.30800455) 中国高等教育博士点基金资助项目(No.200806981027)~~ 

主　　题：间充质干细胞 慢病毒载体 绿色荧光蛋白 单克隆 

摘      要：目的探究慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)的理想条件,以获得稳定高表达GFP的MSCs亚群。方法慢病毒载体介导GFP以25、50、100、200和400的感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别作用12 h和24 h感染MSCs,倒置荧光显微镜及流式细胞术检测各组的感染效率和荧光强度,MTT法评价感染对MSCs增殖的影响,从而确定理想的感染条件。平皿克隆套环法挑选理想条件下感染的MSCs单克隆。结果MOI为100、200和400作用24 h时,感染效率较高,分别为88.94%、99.65%、99.42%;MOI为100和200时,感染对MSCs增殖无影响,MOI为400时,感染的MSCs增殖减慢。挑选MOI为200、作用24 h感染组的单克隆细胞,其1月时感染效率为99.95%,且荧光均一、强度很强。结论MOI为200作用24 h是慢病毒载体介导GFP标记MSCs的理想条件;通过细胞单克隆技术可获得稳定高表达GFP的MSCs亚群。