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单克隆和不同接种密度人永生化骨髓基质细胞体内外分化差异性的研究

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中华医学杂志 2009年第31期89卷 2202-2205页

作者：孙泽林戚晓渊李储忠张亚卓河北省唐山市华北煤炭医学院附属医院神经外科 063000 河北省唐山市华北煤炭医学院附属医院检验科 063000 北京市神经外科研究所

目的研究单克隆和接种密度对永生化骨髓基质干细胞（hMSC—TERT）体内、外分化潜能的影响，寻找合理的体外培养模式。方法从亲代hMSC—TERT中，建立了30个单克隆细胞系，并以不同的接种密度建立了2个独立的细胞系。对各细胞系在体外向... 详细信息

目的研究单克隆和接种密度对永生化骨髓基质干细胞（hMSC—TERT）体内、外分化潜能的影响，寻找合理的体外培养模式。方法从亲代hMSC—TERT中，建立了30个单克隆细胞系，并以不同的接种密度建立了2个独立的细胞系。对各细胞系在体外向脂肪、骨、神经样细胞方向诱导分化，用免疫组化的方法测定细胞在SCID鼠体内的多向分化潜能。结果高接种密度细胞比单克隆和低接种密度细胞拥有更多的体外分化潜能，更好的保持了基质细胞特性。各单克隆细胞体内分化能力存在差异，甚至可以具有亲代细胞没有的分化能力。结论以高接种密度的方式培养多克隆原代细胞，能够保持细胞的原有特性。移植前，筛选特定的单克隆细胞，进行特定用途的移植。

关键词：骨髓细胞于细胞细胞分化单克隆细胞计数

单克隆抗体在治疗视神经脊髓炎谱系疾病中的临床应用进展

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中华眼底病杂志 2021年第3期37卷 240-244页

作者：付俊霞魏世辉解放军总医院眼科医学部北京100853

视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)是一类主要累及视神经和脊髓的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病,由于其严重的致盲性和致残性,如何有效预防复发成为眼科医师考虑的重点。随着对NMOSD发病机制的深入了解和科技手段的进步,越来越多的单克隆抗体(m... 详细信息

视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)是一类主要累及视神经和脊髓的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病,由于其严重的致盲性和致残性,如何有效预防复发成为眼科医师考虑的重点。随着对NMOSD发病机制的深入了解和科技手段的进步,越来越多的单克隆抗体(mAb)不断进入临床试验研究,其中B细胞表面抗原CD20阻断剂利妥昔单抗已成为治疗NMOSD的一线药物,CD19阻断剂inebilizumab可降低NMOSD患者复发,减轻疾病致残;免疫治疗的基础上附加白细胞介素6受体阻断剂satralizumab、补体C5抑制剂eculizumab可降低复发;而纳他珠单抗、阿仑单抗等部分mAb可能对NMOSD的治疗无效。有关mAb治疗适应证的拓展及新药的上市仍需开展大规模、国际间的合作与更多的临床试验,同时其潜在的不良事件及费用问题不容忽视。

关键词：视神经脊髓炎抗体单克隆综述

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单克隆人胰腺干细胞的形态和蛋白表达特征

解剖学报 2009年第2期40卷 215-218页

作者：效梅安立龙窦忠英广东海洋大学农学院动物医学系广东湛江524088 西北农林科技大学国家干细胞工程技术中心陕西分中心陕西杨凌712100

目的研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性。方法10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化。原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代。在传代中逐渐纯化胰腺干细胞。克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养。活力较好的细胞液... 详细信息

目的研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性。方法10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化。原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代。在传代中逐渐纯化胰腺干细胞。克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养。活力较好的细胞液氮冷冻保存。采用HE和Giemsa染色,观察单克隆人胰腺干细胞的形态特征;通过透射电镜分析其超微结构。用免疫组织化学反应和RT-PCR方法,检测其蛋白水平和mRNA水平的表达特征。结果1例来源于4月龄男性胎儿的单克隆人胰腺干细胞建系,传50代。液氮保存细胞1×109个以上。单克隆人胰腺干细胞完全贴璧时呈多角形上皮样,单核,圆形或椭圆形,单、双或多核仁。细胞核质比大,线粒体、内质网等细胞器均不发达,胞质内无分泌颗粒,属于发育早期的胰腺上皮样细胞。共表达胰肠同源域因子1（pdx1）、胰高血糖素、巢蛋白及角蛋白19（CK19）,不表达胰岛素、周期蛋白34（CD34）、CD44及CD45。转录表达pdx1、胰高血糖素及巢蛋白的mRNA,不转录表达胰岛素。结论首次证实1例共表达pdx1、胰高血糖素、巢蛋白及CK19蛋白的单克隆人胰腺干细胞系。

关键词：胰腺干细胞单克隆形态表达特征免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应人

单克隆靶向转移人肝癌细胞株和裸鼠移植模型的建立

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中华肝脏病杂志 2012年第7期20卷 532-536页

作者：万金良陶中华吴伟忠唐俊孙惠川王鲁任正刚樊嘉复旦大学附属中山医院肝癌研究所上海200032

目的建立具有器官转移亲嗜性的单克隆人肝癌细胞株和相应的裸鼠移植模型。方法取肺和淋巴结转移亲嗜性人肝癌荧光细胞株HCCLM3-R-LMI及HCCLM3-R-LnM1，通过极限稀释法进行单细胞培养，获得8个HCCLM3-R-LMI来源的单克隆细胞株（LMI-S2，... 详细信息

目的建立具有器官转移亲嗜性的单克隆人肝癌细胞株和相应的裸鼠移植模型。方法取肺和淋巴结转移亲嗜性人肝癌荧光细胞株HCCLM3-R-LMI及HCCLM3-R-LnM1，通过极限稀释法进行单细胞培养，获得8个HCCLM3-R-LMI来源的单克隆细胞株（LMI-S2，-S3，-S4，-S5，-S11，-S15，-S21，-S23）和5个HCCLM3-R-LnMI来源的单克隆细胞株（LnM1-S7，-S11，-S13，-S17，-S20）;将上述人肝癌单克隆细胞分别接种于4周龄的裸鼠皮下，3周后皮下瘤组织移植至裸鼠的肝脏，6周后观察裸鼠肺和腹腔淋巴结转移灶荧光面积，并与肺组织连续切片中的转移灶数目进行比较。同一株细胞的肺和淋巴结转移情况比较用Wilcoxon秩和检验，单克隆细胞株之间的肺、淋巴结转移隋况比较用Kruskal-Wallis检验。结果在13株人肝癌单克隆细胞中，有6株细胞形成皮下瘤，移植至裸鼠肝脏后表现出不同的转移潜能和器官靶向特性。其中LM1-S3，LM1-S4，LM1-S5和LM1-S11单克隆细胞的肺转移积分吸光度值分别为80923±10162、1506000±297064、36140±8210和508448±1342729（P〈0．01），但不发生淋巴结转移。LnM1-S11单克隆细胞的肺与淋巴结转移灶积分吸光度值分别为435062±206620和1254000±225171。结论成功建成了不同转移潜能和器官亲嗜性的人肝癌单克隆细胞株和裸鼠移植模型，其中LM1-S3，LM1-S4，LM1-S5和LM1-S11为肺特异亲嗜性的人肝癌单克隆细胞株，而LnM1-S11细胞为肺和淋巴结双重亲嗜性的人肝癌单克隆细胞株，为肝癌转移器官靶向性研究提供了理想的体内外模型。

关键词：癌肝细胞肿瘤转移单克隆器官倾向性模型动物荧光抗体技术

环鸟苷酸兔单克隆抗体的制备和竞争酶联免疫吸附测定方法的建立

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浙江大学学报（医学版） 2015年第4期44卷 423-428页

作者：谭兴梅胡海峰陈枢青浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所浙江杭州310058 宜康(杭州)生物技术有限公司浙江杭州310015

目的：研制环鸟苷酸（cGMP）兔单克隆抗体，并建立测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。方法：用人工合成的环鸟苷酸一钥孔血蓝蛋白（cGMP-KLH）免疫新西兰大白兔，采用Epitomics公司的兔单克隆抗体技术制备针对cGMP的兔单克隆抗体；应用cGMP... 详细信息

目的：研制环鸟苷酸（cGMP）兔单克隆抗体，并建立测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。方法：用人工合成的环鸟苷酸一钥孔血蓝蛋白（cGMP-KLH）免疫新西兰大白兔，采用Epitomics公司的兔单克隆抗体技术制备针对cGMP的兔单克隆抗体；应用cGMP兔单克隆抗体建立竞争ELISA方法，并对该方法的特异性、精密度和回收率进行测定。结果：所制备的cGMP兔单克隆抗体的效价为3．1．g／mL，50％抑制浓度（IC50）为12．57ng／mL。与环磷酸肌苷的交叉反应率为33．1％，与其他结构类似的化合物无交叉反应。所建立的cGMP竞争ELISA方法的检测范围为0～120ng／mL，最低检测限为1．95ng／mL，回收率为89％～103％，批次内和批次间的精密度分别小于11．68％和13．85％。结论：成功制备高效价、高特异性的cGMP兔单克隆抗体，并建立了测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。

关键词：环GMP 抗体单克隆酶联免疫吸附测定兔

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体通过P-糖蛋白逆转乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药性的分子机制

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肿瘤 2013年第1期33卷 8-14页

作者：陈文慧徐萌杜超超赵建夫潘兰红李汉初向军俭邓宁暨南大学附属第一医院肿瘤科广东广州510630 暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心广东广州510632

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic broblast growth factor,bFGF mAb)通过P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)对人乳腺癌多柔比星(adriamycin,ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转机制。方法:CCK-8(cell counting kit-8)法检测bFGF mAb对MCF-7/ADM细胞增殖的影响及其对化疗药物耐药的逆转作用;bFGF mAb作用后,FCM检测MCF-7/ADM细胞的细胞周期、P-gp的表达及细胞内罗丹明(rhodamine,Rho)123的荧光强度,实时荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞中MDR1和碱性成纤维细胞生长因子(basic broblast growth factor,bFGF)mRNA的表达。结果:1μg/mL bFGF mAb对MCF-7和MCF-7/ADM细胞的抑制率分别为(19.87±1.05)%和(27.34±2.79)%,差异有统计学意义(P<0.01)。bFGF mAb可有效逆转MCF-7/ADM细胞对ADM、吉西他滨(gemcitabine,GEM)和奥沙利泊(oxaliplatin,OXA)的耐药性,逆转指数分别为4.46、4.25和2.18。bFGF mAb作用MCF-7/ADM细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,P-gp表达下调,细胞内Rho123的荧光强度增强,MDR1和bFGF mRNA的表达下调,与未作用组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:bFGF mAb能抑制MCF-7/ADM细胞增殖并逆转其MDR,该作用机制可能与bFGF mAb下调MDR1/P-gp表达、抑制P-gp功能以及增加细胞内化疗药物浓度有关。

关键词：乳腺肿瘤碱性成纤维细胞生长因子抗体单克隆 P-糖蛋白抗药性肿瘤

靶向上皮特异性抗原阳性肝癌干细胞单克隆抗体联合顺铂治疗肝癌的实验研究

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中华肿瘤杂志 2016年第5期38卷 333-339页

作者：何永燕遇珑容雁孙立新孙力超杨治华冉宇靓李力广西医科大学医学科学实验中心南宁530021 国家癌症中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室 100021 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科南宁530021

目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮... 详细信息

目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮特异性抗原（ESA）在Bel7402-V3细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的15D2阳性细胞的自我更新能力以及15D2对Bel7402．V3细胞自我更新能力的影响。CCK8法检测15D2对细胞顺铂耐药能力的影响。裸鼠体内治疗实验分析15D2联合顺铂对Bel7402．V3移植瘤生长的抑制作用。结果Bel7402-V3细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。细胞免疫荧光显示，单克隆抗体15D2识别的抗原分子能与PKH26和ESA在Bel7402-V3细胞上共定位。15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的体外成球率分别为（30．4±3．4）％和（8．8±1．8）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。15D2阳性细胞具有更高的顺铂耐药性，15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为1．014和0．365μmol／L。单克隆抗体15D2能够显著抑制Bel7402．V3细胞的无血清成球，抑制率为37．5％。经15D2处理后的Bel7402-V3细胞，顺铂耐药能力明显下降，其Ic50为0．211μg／ml，而对照组的IC50为0．325μg／ml。抗体体内治疗实验结果显示，50、25、12．5mg／kg15D2组的肿瘤生长抑制率分别为82．6％、71．4％和60．0％，50mg／kg15D2＋顺铂组的肿瘤生长抑制率为91．0％，顺铂组的肿瘤生长抑制率为56．7％。结论单克隆抗体15D2是抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体，为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。

关键词：肝肿瘤细胞系肿瘤肿瘤干细胞抗体单克隆顺铂上皮特异性抗原抗药性

单克隆抗体的反向被动血凝抑制试验在流行性乙型脑炎快速诊断中的应用

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中华儿科杂志 1989年第6期27卷 325-326+383页

作者：彭匡通费莉陈士垣林厚基欧阳武智南京医学院第二附属医院儿科南京市传染病医院

用乙型脑炎(乙脑)单克隆抗体致敏羊血细胞的反向被动血凝抑制试验(M-RBC RPHI)检测51例乙脑患儿双份血清的特异性抗体,并与血凝抑制试验(HI)对比,阳性率分别为74.5%与62.3%,经统计学处理,两法结果基本一致,而前者简便快速,便于在基层单... 详细信息

用乙型脑炎(乙脑)单克隆抗体致敏羊血细胞的反向被动血凝抑制试验(M-RBC RPHI)检测51例乙脑患儿双份血清的特异性抗体,并与血凝抑制试验(HI)对比,阳性率分别为74.5%与62.3%,经统计学处理,两法结果基本一致,而前者简便快速,便于在基层单位使用。同时对上述病例用IgM抗体捕获酶联法(MAC-ELISA)及2-巯基乙醇法(2-ME)测血清中的乙脑特异性IgM抗体,阳性率分别为64.7%及27.5%,故用于乙脑的早期诊断,MAC-ELISA明显优于2-ME法。

关键词：反向被动血凝抑制试验抗体单克隆乙型脑炎

CD20单克隆抗体在重症系统性红斑狼疮患儿治疗中的应用

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中华儿科杂志 2012年第9期50卷 697-704页

作者：苏改秀吴凤岐王芳周志轩黄小兰鲁杰首都儿科研究所附属儿童医院风湿免疫科北京100020 首都儿科研究所附属儿童医院分子免疫室北京100020 首都儿科研究所附属儿童医院临床中心实验室北京100020

目的探讨CD20单克隆抗体（利妥昔单抗）治疗重症儿童系统性红斑狼疮（SLE）的有效性和安全性。方法诊断依据1997年美国风湿病学会SLE的分类标准。纳入标准：年龄≤16岁，至少1个以上重要器官受累，SLEDAI评分〉10分，常规治疗反应欠佳... 详细信息

目的探讨CD20单克隆抗体（利妥昔单抗）治疗重症儿童系统性红斑狼疮（SLE）的有效性和安全性。方法诊断依据1997年美国风湿病学会SLE的分类标准。纳入标准：年龄≤16岁，至少1个以上重要器官受累，SLEDAI评分〉10分，常规治疗反应欠佳。治疗方法：抗CD20单抗剂量375mg／（m^2次），于第0、14天分次静脉输注。于CD20单抗治疗前及治疗后2周、1、3、6、12个月评估疗效，并监测不良反应。结果共20例SLE患儿，男女比1：3，年龄5～16岁，病程（3．0±2．5）年，平均随访（27．0±7．8）个月。10例狼疮脑病患儿谵妄、认知障碍等在1个月内明显改善；15例狼疮肾炎患儿中14例用药2～3个月后改善，1例无明显缓解；4例狼疮肺炎患儿用药1个月内症状减轻；18例血细胞减少患儿中16例在1个月内恢复。95％患儿（19／20）2周内B细胞清除，90％患儿（18／20）B淋巴细胞计数于1年内恢复。SLEDAI评分用药后明显降低，用药1年泼尼松剂量从（45．0±4．7）mg／m^2降至（12．0±2．7）mg／m^2（P〈0．001）。用药半年内5例患儿出现肺炎，其中2例重症肺炎分别为曲霉菌肺炎及卡氏肺囊虫肺炎，均治疗后好转，无死亡病例。随B细胞恢复，2例患儿分别于治疗15、18个月后病情反复，给予第2疗程抗CD20单抗后，1例病情再次缓解，另外1例病情缓解不明显。结论抗CD20单抗治疗重症儿童SLE疗效肯定，耐受性较好，部分病例可能发生严重感染。

关键词：抗原 CD20 抗体单克隆红斑狼疮系统性治疗结果儿童