具有多种剪接形式的RNA结合蛋白基因的克隆、表达及其细胞内定位
Cloning,expression and cellular localization of gene of RNA binding protein with multiple splicing (RBPMS)作者机构:军事医学科学院生物工程研究所北京100850
出 版 物:《军事医学科学院院刊》 (Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences)
年 卷 期:2006年第30卷第2期
页 面:106-108,112页
核心收录:
学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种]
基 金:国家自然科学基金资助(30428012 30470378)
摘 要:目的:构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)基因的真核表达载体,并在真核细胞中进行表达,确定RBPMS在细胞中的定位.方法:采用PCR技术,从人卵巢文库中扩增RBPMS基因的完整编码序列,将所扩增基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体上,转染人胚肾细胞293T,Western印迹鉴定RBPMS的表达.然后将所扩增基因克隆到带绿色荧光标签的pEGFP-C1表达载体上,转染乳癌细胞ZR75-1,观察RBPMS在细胞中的定位情况.结果:经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确,Western印迹实验证明RBPMS表达成功,通过激光共聚焦显微镜观察,RBPMS分布在胞质中,在40%~50%细胞中RBPMS呈聚集状分布.结论:成功构建了RBPMS基因的真核表达载体,该基因产物分布在胞质中,在40%~50%细胞中RBPMS呈聚集状分布.