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基础医学与临床 2024年第5期44卷 619-625页

作者：赵羚延何浏马艳妮余佳中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(rbpms)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中rbpms的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测rbpms过表达效率;... 详细信息

目的研究具有多重剪接功能的RNA结合蛋白(rbpms)对携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系THP-1功能的影响。方法使用GEO数据库分析造血系统中rbpms的表达情况;通过慢病毒感染THP-1细胞,RT-qPCR和Western blot检测rbpms过表达效率;通过高通量测序检测rbpms过表达后对THP-1细胞转录组的影响。分别用CCK-8法和流式细胞仪检测rbpms过表达对白血病细胞增殖以及迁移能力的影响。结果rbpms在携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病干细胞中异常低表达。rbpms过表达后THP-1细胞的增殖和迁移能力显著降低(Prbpms可以抑制携带MLL-AF9融合基因的急性髓系白血病细胞系的细胞增殖与迁移。

关键词： rbpms MLL-AF9 急性髓系白血病急性髓系白血病细胞系(THP-1)

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Pan-retinal ganglion cell markers in mice, rats, and rhesus macaques

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Zoological Research 2023年第1期44卷 226-248页

作者： Francisco M.Nadal-Nicolás Caridad Galindo-Romero Fernando Lucas-Ruiz Nicholas Marsh-Amstrong Wei Li Manuel Vidal-Sanz Marta Agudo-Barriuso Grupo de Oftalmología Experimental Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria Pascual Parrilla(IMIB)Murcia 30120Spain Dpto.Oftalmología Facultad de MedicinaUniversidad de MurciaMurcia 30120Spain Retinal Neurophysiology Section National Eye InstituteNational Institutes of HealthBethesdaMaryland 20892-2510USA Department of Ophthalmology and Vision Science University of CaliforniaDavisCA 95817USA

Univocal identification of retinal ganglion cells(RGCs) is an essential prerequisite for studying their degeneration and neuroprotection. Before the advent of phenotypic markers, RGCs were normally identified using retrograde tracing of retinorecipient areas. This is an invasive technique, and its use is precluded in higher mammals such as monkeys. In the past decade, several RGC markers have been described. Here, we reviewed and analyzed the specificity of nine markers used to identify all or most RGCs, i.e., pan-RGC markers, in rats, mice, and macaques. The best markers in the three species in terms of specificity, proportion of RGCs labeled, and indicators of viability were BRN3A, expressed by vision-forming RGCs, and rbpms, expressed by vision-and non-vision-forming RGCs. NEUN, often used to identify RGCs, was expressed by non-RGCs in the ganglion cell layer, and therefore was not RGC-specific. γ-SYN, TUJ1, and NF-L labeled the RGC axons, which impaired the detection of their somas in the central retina but would be good for studying RGC morphology. In rats, TUJ1 and NF-L were also expressed by non-RGCs. BM88, ERRβ,and PGP9.5 are rarely used as markers, but they identified most RGCs in the rats and macaques and ERRβ in mice. However, PGP9.5 was also expressed by non-RGCs in rats and macaques and BM88 and ERRβ were not suitable markers of viability.

关键词： RGC Optic nerve crush BM88 BRN3A Estrogen-related receptorβ ERRβ NEUN Neurofilament-L PGP9.5 rbpms γ-SYN βIII-tubulin TUJ1

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MicroRNA PC-3p-40996靶向调节鹿茸茸皮细胞rbpms基因表达机制与功能研究

MicroRNA PC-3p-40996靶向调节鹿茸茸皮细胞RBPMS基因表达机制与...

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作者：付蓝仪东北林业大学

学位级别：硕士

MicroRNA PC-3p-40996(以下简称miRNA-40996)是在马鹿(Cervus elaphus)鹿茸的快速生长周期中对鹿茸茸皮组织进行高通量测序得到的新的小分子RNA,且具有物种和组织特异性。rbpms是具有多种剪接形式的RNA结合蛋白,参与RNA代谢的各个方面,... 详细信息

MicroRNA PC-3p-40996(以下简称miRNA-40996)是在马鹿(Cervus elaphus)鹿茸的快速生长周期中对鹿茸茸皮组织进行高通量测序得到的新的小分子RNA,且具有物种和组织特异性。rbpms是具有多种剪接形式的RNA结合蛋白,参与RNA代谢的各个方面,在基因转录后调控中起着重要的作用,且已有研究表明rbpms可以增强Smad2和Smad3基因的转录活性,Smad蛋白家族在TGF-β通路中起到信号转导的关键作用,而TGF-β信号通路在马鹿鹿茸的生长发育过程中发挥了重要的调节作用,可以调控鹿茸的快速生长和再生过程。因此,本研究的主要目的是探究miRNA-40996、rbpms与Smad2和Smad3基因的相互作用关系。为了研究miRNA-40996在鹿茸茸皮细胞中的生物学功能,本实验首先对miRNA-40996进行靶标预测,发现rbpms基因可能为其下游靶标,为了证实rbpms基因为miRNA-40996下游有直接作用关系的靶基因,本实验将预测的miRNA-40996与rbpms mRNA的3’UTR区域结合位点作为依据合成序列,分别构建rbpms 3’UTR的野生型和突变型双荧光素酶报告载体psi CHECKM-2-rbpms-3’UTR-WT和psi CHECKM-2-rbpms-3’UTR-MUT,将野生型与突变型载体分别与miRNA模拟物miRNA-40996 mimics和NC mimics共转染293T细胞,双荧光素酶报告实验检测转染的后293T细胞中双荧光素酶的活性,结果显示只有共转染rbpms 3’UTR野生型载体和miRNA-40996 mimics的细胞组荧光素酶活性显著下降;再分别将miRNA-40996 mimics和NC mimics转染鹿茸茸皮细胞,western blot实验检测转染后茸皮细胞中内源rbpms蛋白相对表达水平,结果显示与转染了NC mimics的细胞组相比,转染了miRNA-40996 mimics的茸皮细胞组中内源rbpms蛋白表达水平显著降低。在验证了miRNA-40996能够靶向rbpms基因后,为进一步研究miRNA-40996、rbpms与Smad2和Smad3的作用关系,用miRNA-40996 mimics和NC mimics分别转染鹿茸茸皮细胞,RT-q PCR实验检测转染后细胞中Smad2和Smad3 mRNA水平的表达,结果显示相比于NC组,转染了miRNA-40996 mimics的细胞组中Smad2和Smad3mRNA表达量显著下降;再用western blot实验检测分别转染miRNA-40996 mimics和NC mimics的鹿茸茸皮细胞中内源rbpms和Smad3蛋白的表达水平,结果显示,对比NC组细胞,转染miRNA-40996 mimics细胞组中rbpms和Smad3蛋白的相对表达水平均显著降低,且Smad3蛋白表达与rbpms蛋白表达具有相关性。结论:miRNA-40996具有生物学作用,在rbpms 3’UTR上具有特异性结合位点,可以通过靶向rbpms进而调控Smad2和Smad3基因。

关键词： MicroRNA PC-3p-40996 rbpms Smad2 Smad3 鹿茸茸皮细胞

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rbpms基因在斑马鱼心脏早期发育过程中的作用初步研究

RBPMS基因在斑马鱼心脏早期发育过程中的作用初步研究

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2018年中国水产学会学术年会

作者：黄姣霍锦倩刘姣祖尧张庆华李伟明任建峰上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室密歇根州立大学渔业与野生动物系

心脏形成和早期发育机制的研究有助于理解人类先天性心脏病的发病机理和促进临床的预防、诊断和治疗。我们课题组前期斑马鱼早期胚胎心脏关键发育时间点转录组测序结果显示:rbpms2a和rbpms2b在斑马鱼心脏4个发育时间点都显著高表达。为... 详细信息

心脏形成和早期发育机制的研究有助于理解人类先天性心脏病的发病机理和促进临床的预防、诊断和治疗。我们课题组前期斑马鱼早期胚胎心脏关键发育时间点转录组测序结果显示:rbpms2a和rbpms2b在斑马鱼心脏4个发育时间点都显著高表达。为深入研究该基因家族在心脏发育中的功能,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建rbpms基因家族3个基因,即rbpms,rbpms2a和rbpms2b单基因纯合突变体。并利用ISH（Insitu hybridization）和q-PCR技术分析了该基因家族在胚胎期和成年期不同组织的表达情况。ISH结果和q-PCR结果都显示rbpms2a和rbpms2b在心脏显著高表达。我们推测rbpms基因家族可能对于斑马鱼的心脏发育具有重要的调控作用。

关键词： rbpms CRISPR/Cas9 ISH q-PCR 心脏发育

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具有多种剪接形式的RNA结合蛋白基因的克隆、表达及其细胞内定位

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军事医学科学院院刊 2006年第2期30卷 106-108,112页

作者：孙琰张浩叶棋浓军事医学科学院生物工程研究所北京100850

目的：构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白（rbpms）基因的真核表达载体,并在真核细胞中进行表达,确定rbpms在细胞中的定位.方法：采用PCR技术,从人卵巢文库中扩增rbpms基因的完整编码序列,将所扩增基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体... 详细信息

目的：构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白（rbpms）基因的真核表达载体,并在真核细胞中进行表达,确定rbpms在细胞中的定位.方法：采用PCR技术,从人卵巢文库中扩增rbpms基因的完整编码序列,将所扩增基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体上,转染人胚肾细胞293T,Western印迹鉴定rbpms的表达.然后将所扩增基因克隆到带绿色荧光标签的pEGFP-C1表达载体上,转染乳癌细胞ZR75-1,观察rbpms在细胞中的定位情况.结果：经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确,Western印迹实验证明rbpms表达成功,通过激光共聚焦显微镜观察,rbpms分布在胞质中,在40%～50%细胞中rbpms呈聚集状分布.结论：成功构建了rbpms基因的真核表达载体,该基因产物分布在胞质中,在40%～50%细胞中rbpms呈聚集状分布.

关键词： rbpms 克隆基因表达细胞内定位

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