小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达

作     者：陈瑜 赵远 岳俊 李鸿钧 和占龙 马开利 马进 吴正存 唐东红 鲁帅尧 

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所中国医学科学院医学灵长类动物研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2016年第26卷第2期

页      面：119-125,135页

学科分类：08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(“c AMP信号通路介导的FGF21对T2DM糖脂代谢的调控机制研究”,No.81570749) 云南省应用基础研究面上项目(“FGF21和INS对1型糖尿病的联合基因治疗研究”,No.2013FB089) 协和青年基金和中央高校基本科研业务费专项(“恒河猴resistin剪接体的发现及其对胰岛素敏感性的调节作用与分子机制”,No.33320140083) 

主　　题：resistin 慢病毒载体 靶细胞 表达 小鼠 

摘      要：[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。