戊型肝炎病毒诊断抗原的克隆表达及抗原性初步鉴定

作     者：万李 苏秋东 伊瑶 毕胜利 管茶香 Wan Li;Su Qiudong;Yi Yao;Bi Shengli;Guan Chaxiang

作者机构：中南大学湘雅医学院生理学系长沙410000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 

出 版 物：《中华流行病学杂志》 (Chinese Journal of Epidemiology)

年 卷 期：2015年第36卷第3期

页      面：275-279页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家科技重大专项(2009ZX10004-711) 湖南省自然科学基金(14JJ2040) 

主　　题：戊型肝炎病毒 融合蛋白N5 基因克隆 血清学检测 

摘      要：目的 克隆、表达与纯化硫氧还原蛋白-戊型肝炎病毒（HEV）诊断抗原（命名为N5）,并对其抗原性和血清学检测效果初步评价。方法 根据GenBank上HEV-ORF2以及ORF3羧基端的基因序列,按照大肠埃希菌密码子偏好表进行密码子优化,全基因合成后插入M48原核表达载体中,在大肠埃希菌中表达融合硫氧还蛋白的融合蛋白N5。并利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,用Western blot技术评价其抗原性,并利用实验室和临床检测确定的HEV感染阴、阳性血清评价其血清学检测效果。结果 成功构建表达N5诊断抗原的重组质粒;高水平表达并纯化获取纯度高、浓度大的可溶性诊断抗原;Western blot结果显示融合蛋白N5可与HEV IgM抗体阳性血清特异性结合,具有良好的抗原性;以融合蛋白N5作为捕获抗原,建立间接ELISA,对病原检测和临床诊断确诊的40份戊型肝炎病例血清和40份健康人血清进行检测,其灵敏度和特异度分别为95%（38/40）和90%（36/40）。结论 成功构建了可表达融合硫氧还蛋白的HEV诊断抗原的重组质粒,并获得表达量高、抗原性强的可溶性融合蛋白N5,可应用于HEV血清学诊断,且有良好的应用前景。