淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

作     者：郭晓玲 朱平 朱霞 刘静 欧媛 杜金伟 GUO Xiao-ling;ZHU Ping;ZHU Xia;LIU Jing;OU Yuan;DU Jin-wei

作者机构：北京大学第一医院血液内科 郑州大学第三医院儿科 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2005年第85卷第21期

页      面：1476-1480页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30470739) 国家"863"高技术研究发展计划基金资助项目(2002AA229011) 北京市自然科学资金资助项目(7032028) 

主　　题：抗原肽 T细胞克隆 HLA-A*0201 人类白细胞抗原(HLA) 免疫球蛋白重链可变区 逆转录-多聚酶链反应 细胞毒性T淋巴细胞 外周血单个核细胞 酶联免疫吸附实验 CD8^+CTL 流式细胞仪检测 主要组织相容性 CD4/CD8 ELISA检测 T细胞受体 

摘      要：目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P0.05)。IgHV1QLVQSGAEV/HLAA0201四聚体和CD8双阳性的肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。