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外周血单个核细胞AIM2炎症小体激活释放白细胞介素-18介导带状疱疹的临床研究

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中国疼痛医学杂志 2024年第5期30卷 348-355页

作者：陈泽豪王景高翔宇蒋昌宇李陈广肖礼祖广东医科大学湛江524023 华中科技大学协和深圳医院疼痛科深圳518052 中山大学附属第七医院麻醉科深圳518107

目的:探索在带状疱疹病人不同时期的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中AIM2炎症小体的活化和释放白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)情况并进行初步验证。方法:收集并分离华中科技大学协和深圳医院疼痛科2... 详细信息

目的:探索在带状疱疹病人不同时期的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中AIM2炎症小体的活化和释放白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)情况并进行初步验证。方法:收集并分离华中科技大学协和深圳医院疼痛科2022年4月至2024年1月67名急性期带状疱疹神经痛(acute herpetic neuralgia,AHN)、58名亚急性期带状疱疹神经痛(subacute herpetic neuralgia,SHN)、38名带状疱疹后神经痛(post herpetic neuralgia,PHN)病人及30名健康对照者的外周血单个核细胞和血清。通过实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹法及蛋白质芯片技术检测黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2,AIM2)炎症小体相关基因和蛋白的表达情况。结果:在基因表达和蛋白质水平上与健康对照者相比,AIM2和IL-18的基因表达在带状疱疹不同时期均显著上升(P细胞膜成孔活性的GSDMD-NT片段,诱导细胞焦亡。不同带状疱疹时期病人血清中IL-18的分泌水平明显升高,尤其在PHN时期,上升最为显著。结论:外周血单个核细胞中AIM2炎症小体激活,释放的IL-18参与带状疱疹疾病的发生发展过程。

关键词：带状疱疹 AIM2炎症小体白细胞介素-18 细胞焦亡外周血单个核细胞

重症肌无力患者外周血单个核细胞中线粒体自噬和凋亡相关基因表达及其诊断价值

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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 481-488页

作者：蔡东红李青柯铃铃钟慧雅江其龙张涵宋雅芳广州中医药大学科技创新中心广州中医药大学脾胃研究所广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院脾胃病科广东广州510405 广东药科大学中药学院广东广州510405

目的:探讨重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中线粒体自噬和凋亡相关基因的表达水平,阐明其对MG诊断的指导价值。方法:收集并提取50名健康对照者(对照组)和50例MG患者(MG组)的PBMCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western b... 详细信息

目的:探讨重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中线粒体自噬和凋亡相关基因的表达水平,阐明其对MG诊断的指导价值。方法:收集并提取50名健康对照者(对照组)和50例MG患者(MG组)的PBMCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测线粒体自噬因子磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)诱导激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶PARK2(Parkin)、泛素结合蛋白62(p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)及凋亡因子细胞色素C(Cyt-C)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)的mRNA以及蛋白表达水平,根据mRNA检测结果设定多个不同临界值,在每个临界值处计算出相应的灵敏度和特异度,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果:与对照组比较,MG组患者PBMCs中的自噬因子PINK1、Parkin和LC3Ⅱ的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p62 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01);凋亡因子Cyt-C、Bax、caspase 3和caspase 9 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Cyt-C mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。ROC曲线检测,PINK1、Parkin、p62和LC3Ⅱ的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.9696(95%CI:0.9435~0.9957)、0.9440(95%CI:0.9047~0.9833)、0.8556(95%CI:0.7767~0.9345)及0.9088(95%CI:0.8526~0.9650)(P<0.01),灵敏度分别为92%、92%、78%和84%,特异度分别为88%、82%、92%和82%;而Cyt-C、Bax、Bcl-2、caspase 3和caspase 9的AUC均为1.000(P<0.01),灵敏度和特异度均达到100%。结论:MG患者PBMCs中存在线粒体自噬障碍和凋亡增加现象,其对临床诊断MG具有较高的指导价值。

关键词：重症肌无力线粒体自噬细胞凋亡外周血单个核细胞诊断价值

胃癌合并Hp感染外周血单个核细胞中miR-22、NLRP3炎症小体表达及对预后的影响

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中华医院感染学杂志 2024年 2173-2177页

作者：陈伟克胡业晓朱仁武温州市中西医结合医院肿瘤科温州市中西医结合医院普外科

目的探讨胃癌合并幽门螺杆菌(Hp)感染患者外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA-22(miR-22)和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达及对预后的影响。方法选取2019年6月—2022年6月温州市中西医结合医院收治的86例合并Hp感染胃癌患者为Hp阳... 详细信息

目的探讨胃癌合并幽门螺杆菌(Hp)感染患者外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA-22(miR-22)和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达及对预后的影响。方法选取2019年6月—2022年6月温州市中西医结合医院收治的86例合并Hp感染胃癌患者为Hp阳性组,另选取同期63例无Hp感染胃癌患者为Hp阴性组,检测所有患者PBMCs中miR-22、NLRP3、凋亡相关斑点蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)水平。对Hp阳性组进行一年随访,根据患者生存情况分为生存组(n=72)、死亡组(n=14),收集对比两组患者临床资料、miR-22、NLRP3炎症小体表达,采用Kaplan-Meier法分析miR-22、NLRP3炎症小体表达对胃癌合并Hp感染患者预后的影响。结果与Hp阴性组对比,Hp阳性组PBMCs中miR-22表达水平更低,而NLRP3、ASC和Caspase-1表达水平更高(P<0.05)。生存组和死亡组患者浸润深度、淋巴结转移、临床分期、miR-22、NLRP3、ASC和Caspase-1对比,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示,miR-22低表达、NLRP3高表达的胃癌合并Hp感染患者1年生存时间均低于miR-22高表达及NLRP3低表达患者(P<0.05)。结论胃癌合并Hp感染患者PBMCs中miR-22、NLRP3炎症小体异常表达,且与胃癌合并Hp感染患者预后密切相关,可作为评估该类患者的预后重要指标。

关键词：胃癌幽门螺杆菌感染外周血单个核细胞微小RNA-22 NOD样受体蛋白3炎症小体预后

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞System Xc-/GSH/GPX4铁死亡通路的表达及其对炎症因子分泌的影响

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安徽医科大学学报 2024年第1期59卷 64-70页

作者：刘灿马武开陈昌明安阳蒋总黄海贵州医科大学医学检验学院临床生物化学与分子生物学教研室贵阳550004 贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵阳550004

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)胱氨酸/谷氨酸逆转运体(System Xc-)/谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)铁死亡通路中相关基因与蛋白的表达及其对炎症因子分泌的影响。方法纳入RA患者及同期健康体检者各30例... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)胱氨酸/谷氨酸逆转运体(System Xc-)/谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)铁死亡通路中相关基因与蛋白的表达及其对炎症因子分泌的影响。方法纳入RA患者及同期健康体检者各30例,采用Ficoll-hypaque密度梯度离心法分离PBMC,将细胞分为健康对照、RA、铁死亡抑制剂、铁死亡诱导剂组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术FerroOrange荧光探针检测细胞内Fe 2+相对荧光强度、DHE荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)阳性细胞比例,蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR(qPCR)检测核转录因子红系2相关因子(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、GPX4蛋白与mRNA的表达,流式细胞术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、IL-6的含量。结果与健康对照组比较,RA组PBMC内Fe 2+浓度和ROS水平升高,Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白和mRNA的表达降低,PBMC上清液中TNF-α、IL-1、IL-6的含量升高,差异均有统计学意义。与RA组比较,铁死亡抑制剂组PBMC内Fe 2+浓度和ROS水平降低,SLC7A11、GPX4蛋白和mRNA的表达升高,Nrf2蛋白的表达升高,PBMC上清液中IL-6的含量降低、TNF-α的含量升高,差异均有统计学意义。与RA组比较,铁死亡诱导剂组PBMC内ROS水平升高,SLC7A11蛋白和mRNA的表达降低,Nrf2蛋白的表达降低、GPX4蛋白的表达升高,PBMC上清液中TNF-α、IL-1的含量升高,差异有统计学意义。与铁死亡诱导剂组比较,RA患者PBMC细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.0001)。结论RA患者PBMC中存在铁死亡,抑制或诱导RA患者PBMC铁死亡,将抑制或促进炎性因子分泌。抑制RA患者PBMC铁死亡可能有助于治疗RA。

关键词：类风湿关节炎外周血单个核细胞铁死亡 System Xc-/GSH/GPX4

2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血单个核细胞长链非编码RNA H19表达的研究

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中国糖尿病杂志 2024年第5期32卷 364-368页

作者：杨腾王娜冯秀丽张桐毓郑之陈王国凤锦州医科大学连云港市第一人民医院研究生培养基地内分泌科连云港222000 南京医科大学连云港临床医学院内分泌科

目的探讨T2DM合并骨质疏松症(OP)患者外周血单个核细胞(PBMCs)的长链非编码RNA(lncRNA)H19表达及与T2DM合并OP进展的关系。方法选取2022年12月至2023年6月于连云港市第一人民医院内分泌科治疗的T2DM患者176例,根据双能X线测量的骨密度... 详细信息

目的探讨T2DM合并骨质疏松症(OP)患者外周血单个核细胞(PBMCs)的长链非编码RNA(lncRNA)H19表达及与T2DM合并OP进展的关系。方法选取2022年12月至2023年6月于连云港市第一人民医院内分泌科治疗的T2DM患者176例,根据双能X线测量的骨密度(BMD)分为单纯T2DM组(n=76)和OP组(n=100)。比较两组一般资料及生化指标,Spearman相关分析lncRNAH19与其他指标的相关性,Logistic回归分析T2DM合并OP的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNAH19对T2DM合并OP的诊断价值,多元线性回归分析lncRNAH19的影响因素。结果与T2DM组比较,OP组女性占比、年龄、HbA1c、TC、TGF-β1升高(P<0.05),BMI、SUA、BMD、lncRNAH19降低(P<0.05)。Spearman相关分析显示,lncRNAH19表达与BMI、SUA、BMD呈正相关(P<0.05),与年龄、HbA_(1)c、TGF-β1呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、BMI、TC、TGF-β1、lncRNAH19是T2DM合并OP的影响因素。ROC曲线分析显示,lncRNAH19诊断T2DM合并OP的曲线下面积为0.839,敏感度为76.3%,特异度为86.0%。多元线性回归分析显示,年龄、TGF-β1及有无OP是lncRNAH19的影响因素。结论 T2DM合并OP患者PBMCs的lncRNAH19表达降低,通过糖代谢、lncRNAH19/TGF-β1通路参与T2DM合并OP的发生发展。

关键词：糖尿病,2型骨质疏松症外周血单个核细胞长链非编码RNA

重症感染性休克外周血单个核细胞TLRs信号通路变化

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中华医院感染学杂志 2024年 1939-1943页

作者：吴若君范学朋高媛媛杨秀红胡述立熊蓉卢蓉武汉市第一医院重症医学科

目的探究重症感染性休克患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLRs)信号通路及细胞免疫炎症因子变化。方法选取2017年1月-2021年1月武汉市第一医院收治的101例重症感染性休克患者为研究组,根据患者入住重症监护病房(ICU)后28 d内... 详细信息

目的探究重症感染性休克患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLRs)信号通路及细胞免疫炎症因子变化。方法选取2017年1月-2021年1月武汉市第一医院收治的101例重症感染性休克患者为研究组,根据患者入住重症监护病房(ICU)后28 d内预后情况分为病死组33例和生存组68例,另外选取同期体检的120名健康体检者为对照组,采集重症感染性休克患者感染部位分泌物及血液标本进行病原菌鉴定,比较研究组和对照组以及病死组和生存组PBMCs中TLRs信号通路相关因子TLR2 mRNA、TLR4 mRNA、核因子κB(NF-κB)表达、外周血T淋巴细胞亚群以及炎症因子水平差异。结果 101例重症感染性休克患者共分离得到病原菌117株,其中革兰阴性菌占68.38%;研究组PBMCs中TLR2 mRNA、TLR4 mRNA、NF-KB表达及外周血CD8+、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平高于对照组(P外周血CD8+、IL-4、TNF-α水平高于生存组(P<0.05),CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IL-10、IFN-γ水平低于生存组(P<0.05)。结论重症感染性休克感染的病原菌以革兰阴性菌为主,TLRs信号通路异常激活、免疫抑制以及炎症反应加重与重症感染性休克及其预后密切相关。

关键词：重症感染性休克 Toll样受体外周血单个核细胞 T淋巴细胞亚群炎症因子

基于单细胞核转录组测序的多发性大动脉炎外周血单个核细胞图谱分析

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安徽医科大学学报 2024年第6期 1068-1075页

作者：何川丁洋万圣云安徽医科大学第二附属医院血管与胃肠外科皖南医学院第二附属医院介入科

目的基于单细胞核转录组测序(snRNA-seq)技术描绘多发性大动脉炎(TAK)外周血单个核细胞(PBMC)基因和功能的异质性改变，阐述TAK可能的免疫机制。方法收集确诊为TAK患者的PBMC共6例为疾病组(TAK组),同期就诊的健康人群6例PBMC为正常组... 详细信息

目的基于单细胞核转录组测序(snRNA-seq)技术描绘多发性大动脉炎(TAK)外周血单个核细胞(PBMC)基因和功能的异质性改变，阐述TAK可能的免疫机制。方法收集确诊为TAK患者的PBMC共6例为疾病组(TAK组),同期就诊的健康人群6例PBMC为正常组(NC组)。基于snRNA-seq工作流程建库测序，下机数据采用R 3.6.2软件进行主成分分析(PCA)及t-分布随机邻域嵌入(tSNE)分析等手段对两组PBMC样本池的单个核细胞的基因表达进行检测。结果 TAK患者PBMC的免疫细胞的相对比例和含量都发生了改变；高克隆TCR可高度同源性匹配整合素beta-3的氨基酸序列；T细胞介导的干扰素γ和TNFα通路显著上调；TNFRSF13B+记忆B细胞比例明显升高；所有细胞类型中单核细胞所形成的的配体受体相互作用始终最多。结论 TAK的发生发展过程中PBMC参与了复杂的调节，多种免疫炎症因子异常表达，其中单核细胞在PBMC的相互作用中占据了重要地位。

关键词：单细胞核转录组测序多发性大动脉炎外周血单个核细胞免疫

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中铁死亡相关关键基因筛选分析

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中华风湿病学杂志 2024年第2期28卷 93-98,I0004-I0006页

作者：陶康田元李时飞倪兵陈小强翟志芳陆军军医大学第一附属医院皮肤科重庆400038 陆军军医大学病理生理学教研室重庆400038 中国人民解放军中部战区总医院皮肤科重庆430070

目的通过生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮(SLE)患者PBMCs的差异表达基因,筛选并分析铁死亡相关关键基因,从转录水平探索铁死亡参与SLE发病的可能机制。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的子数据库基因芯片公共数据库(GEO)检索... 详细信息

目的通过生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮(SLE)患者PBMCs的差异表达基因,筛选并分析铁死亡相关关键基因,从转录水平探索铁死亡参与SLE发病的可能机制。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的子数据库基因芯片公共数据库(GEO)检索出符合筛选标准的健康对照组(HC组)和SLE患者(SLE组)的数据集和样本信息,利用GEO2R、R语言及相关软件包进行分析获得差异表达基因、基因本体论(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析结果。利用STRING、Cytoscape等工具分析差异基因的蛋白交互作用网络(PPI),探索关键基因与通路,寻找潜在作用靶点。此外,通过实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)验证关键基因在SLE中的表达。采用Mann-Whitney U秩和检验比较2组PBMCs中关键基因的表达差异;采用Spearman秩相关分析探索其与SLE疾病活动度的关系。结果研究纳入了6个数据集,SLE组和HC组的差异基因中与铁死亡相关的基因合计166个。差异基因主要在肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、CD49+细胞和CD31+细胞等免疫细胞中特异性表达。GO富集分析和KEGG通路富集分析提示差异基因主要参与了细胞的氧化应激反应、感染和TNF信号通路等多个与SLE密切相关的信号通路。不同算法筛选出的Hub基因均提示RELA基因为关键基因,且RT-qPCR证实,相较于HC组RELA基因表达水平[0.75(0.37,1.13)],SLE组中表达水平[2.02(1.19,4.06)]出现上升,差异具有统计学意义(Z=-3.08,P=0.002),并与SLE样本对应的SLEDAI呈正相关(r=0.52,P=0.019)。结论多种免疫细胞,包括肺泡巨噬细胞和CD49+NK细胞等的铁死亡过程参与SLE的发病机制,其中RELA基因可能通过NF-κB通路参与SLE患者PBMCs铁死亡过程。

关键词：红斑狼疮,系统性铁死亡外周血单个核细胞生物信息学

1800MHz电磁辐射暴露对大鼠外周血单个核细胞代谢组的影响

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局解手术学杂志 2024年第4期33卷 295-301页

作者：张文娟周超梅湘余争平何旻蒂陆军军医大学军事预防医学系军队劳动卫生学教研室/电磁辐射医学防护教育部重点实验室重庆400038

目的分析电磁辐射暴露对大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)代谢物变化的影响。方法将24只SD大鼠随机分成电磁辐射暴露组(EMR组)和假暴露组(Sham组)。EMR组大鼠置于中心频率1 800 MHz、平均功率密度284.6 V/m的电磁混响箱内,每天暴露10 min... 详细信息

目的分析电磁辐射暴露对大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)代谢物变化的影响。方法将24只SD大鼠随机分成电磁辐射暴露组(EMR组)和假暴露组(Sham组)。EMR组大鼠置于中心频率1 800 MHz、平均功率密度284.6 V/m的电磁混响箱内,每天暴露10 min,连续暴露7 d;Sham组辐照功率为0 W,其他条件及操作与EMR组相同。7 d后,收集大鼠外周血并分离PBMCs进行液相色谱/质谱联用(LC-MS/MS)非靶向代谢组学分析。使用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行主成分分析,单变量分析筛选差异代谢物,再联合mzCloud和ChemSpider数据库对检测到的代谢物进行鉴定,构建代谢通路以分析电磁辐射暴露对大鼠PBMCs代谢组的影响。结果 Sham组与EMR组SD大鼠PBMCs正负离子模式下共检测到差异代谢物2 017种,正离子模式下1 611种,其中847种上调,764种下调;负离子模式下406种,其中220种上调,186种下调。正负离子模式下检测到的差异代谢物包括氨基酸、肽类、有机酸、胆汁酸等。KEGG富集分析显示,正负离子模式下差异代谢物涉及的代谢通路共64个,包括氨基酸代谢,脂类代谢,细胞生长、增殖及死亡,氧化应激,炎症反应等。结论模拟职业环境电磁辐射暴露可以对SD大鼠PBMCs代谢组产生明显影响,其差异代谢产物有望成为电磁辐射暴露的生物标志物。

关键词：电磁辐射外周血单个核细胞代谢组学生物标志物

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