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曼氏血吸虫谷胱甘肽S-转移酶Sm26/2的抗原肽研究

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高等学校化学学报 1998年第12期19卷 1975-1978页

作者：许家喜蔡孟深北京大学化学与分子工程学院北京医科大学药学院

在计算机辅助下，应用Ｇｏｌｄｋｅｙ和ＰＣ－Ｇｅｎｅ程序，根据新报道的曼氏血吸虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｓｍ２６／２的氨基酸序列，进行亲水性、柔韧性、可接近性、电荷分布和二级结构分析，预测出６个抗原肽，并用固相法进行了合成．... 详细信息

在计算机辅助下，应用Ｇｏｌｄｋｅｙ和ＰＣ－Ｇｅｎｅ程序，根据新报道的曼氏血吸虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｓｍ２６／２的氨基酸序列，进行亲水性、柔韧性、可接近性、电荷分布和二级结构分析，预测出６个抗原肽，并用固相法进行了合成．经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法测定，其中的２个对抗日本血吸虫免疫球蛋白多克隆抗体（抗－Ｓｊ－ＩｇＧ－ＰｃＡｂ）显示出较好的抗原性，１个对抗血吸虫表膜单克隆抗体（Ａ６ＭｃＡｂ）显示出较好的抗原性，可作为抗血吸虫病合成多肽疫苗的候选肽段．

关键词：曼氏血吸虫谷胱甘肽S-转移酶抗原肽多肽疫苗

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曼氏和日本血吸虫副肌球蛋白的抗原肽研究

有机化学 2002年第6期22卷 423-427页

作者：杨俊海许家喜北京大学化学与分子工程学院北京100871

副肌球蛋白是世界卫生组织选取的用来发展血吸虫疫苗的重要候选蛋白之一 .在计算机辅助下 ,应用PC Gene程序 ,根据曼氏和日本血吸虫副肌球蛋白的氨基酸序列 ,通过对其亲水性、柔韧性、可接近性和二级结构分析预测出 8个抗原肽 ,并用固... 详细信息

副肌球蛋白是世界卫生组织选取的用来发展血吸虫疫苗的重要候选蛋白之一 .在计算机辅助下 ,应用PC Gene程序 ,根据曼氏和日本血吸虫副肌球蛋白的氨基酸序列 ,通过对其亲水性、柔韧性、可接近性和二级结构分析预测出 8个抗原肽 ,并用固相法进行了合成 .经Dot ELISA法测定 ,其中的 2个对抗日本血吸虫免疫球蛋白多克隆抗体 (抗 Sj IgG PcAb)显示出抗原性。

关键词：曼氏血吸虫日本血吸虫副肌球蛋白抗原肽多肽疫苗血吸虫病治疗

超滤-高效液相色谱法检测pHLA复合物中的抗原肽

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生物工程学报 2022年第3期38卷 1209-1217页

作者：应婷程巧珍陈春廖学俊胡华军中国计量大学生命科学学院浙江杭州310018

重组HLA-Ⅰ类分子/抗原肽复合物(pHLA复合物)在研究人类T细胞特异性免疫应答中有重要用途。pHLA复合物的制备以基因工程及蛋白体外稀释折叠复性技术为基础,在体外复性体系中重组HLA-Ⅰ类分子正确折叠,并结合抗原肽形成复合物。本研究建... 详细信息

重组HLA-Ⅰ类分子/抗原肽复合物(pHLA复合物)在研究人类T细胞特异性免疫应答中有重要用途。pHLA复合物的制备以基因工程及蛋白体外稀释折叠复性技术为基础,在体外复性体系中重组HLA-Ⅰ类分子正确折叠,并结合抗原肽形成复合物。本研究建立了一种超滤-高效液相色谱法(超滤-HPLC法)定量检测重组pHLA复合物中的抗原肽,尤其针对少量制备产物中抗原肽的检测。通过将重组HLA-Ⅰ类分子和抗原肽加入到复性缓冲液中,使重组HLA-Ⅰ类分子的重链(heavy chain,HC)与轻链(β2m)复性折叠,与含锚定残基的VYF抗原肽结合形成pHLA复合物,经超滤去除未结合的游离抗原肽VYF而保留复合物,最后将pHLA复合物经酸处理破坏其相互作用从而释放抗原肽,再超滤收集VYF抗原肽并进行HPLC检测,所测得的VYF抗原肽即为重组HLA-Ⅰ类分子与抗原肽相互作用所结合的抗原肽。结果显示,制备的重组pHLA复合物可被HLA-Ⅰ分子构象特异性抗体W6/32识别,这说明重组HLA-Ⅰ类分子折叠构象正确,可鉴定为pHLA复合物;而超滤-HPLC法也可检测到pHLA复合物中含有抗原肽VYF,因此将超滤-HPLC法用于检测pHLA复合物的方法可行。与Western blotting法相比,超滤-HPLC法定量检测抗原肽浓度范围为0–9μg/mL,可根据复合物中结合的抗原肽量来优化不同结合条件,以提高HLA-Ⅰ类分子折叠效率并促进HLA-Ⅰ类分子结合抗原肽,还可根据pHLA复合物结合的抗原肽含量计算复性体系中形成pHLA复合物的制备率。因此文中所建立的超滤-HPLC法可用于pHLA复合物制备过程的质量控制,在T细胞特异性免疫研究、人工抗原呈递细胞以及特异性四聚体探针应用开发方面都具有优势。

关键词：超滤高效液相色谱重组HLA-Ⅰ类分子抗原肽折叠复性

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分支状多抗原肽系统在疫苗研制中的应用

病毒学报 2011年第1期27卷 86-90页

作者：刘晓宇张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

疫苗接种是预防和控制传染病流行的一种重要措施。常用的疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗。目前的亚单位疫苗多是采用重组DNA技术用微生物或哺乳动物细胞产生。但分子量较小的抗原很难用重组DNA技术制备，化学合成便成为较为... 详细信息

疫苗接种是预防和控制传染病流行的一种重要措施。常用的疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗。目前的亚单位疫苗多是采用重组DNA技术用微生物或哺乳动物细胞产生。但分子量较小的抗原很难用重组DNA技术制备，化学合成便成为较为简便的途径。

关键词：疫苗接种抗原肽重组DNA技术亚单位疫苗应用系统哺乳动物细胞减毒活疫苗

人脑胶质瘤特异抗原肽白介素13α2受体的原核表达

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中国肿瘤临床 2011年第9期38卷 488-491页

作者：俞文桥陈作兵张匀梁忠炎张绍阳郑伟明浙江大学医学院附属第一医院急诊外科杭州市310000 温州医学院附属第一医院神经外科

目的:构建白介素13 α2受体(Interleukin-13α2 Receptor,IL-13Rα2)基因的表达质粒,并检测其在体外原核表达情况,为脑胶质瘤的免疫治疗奠定基础。方法:用RT-PCR技术从U251胶质瘤细胞株扩增IL-13Rα2基因,并与克隆质粒pMDl9 Simple T载... 详细信息

目的:构建白介素13 α2受体(Interleukin-13α2 Receptor,IL-13Rα2)基因的表达质粒,并检测其在体外原核表达情况,为脑胶质瘤的免疫治疗奠定基础。方法:用RT-PCR技术从U251胶质瘤细胞株扩增IL-13Rα2基因,并与克隆质粒pMDl9 Simple T载体连接转入DH5α菌克隆,筛选重组阳性菌落,用Xhol和HindⅢ将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒pET-28a连接,转入BL21(DE3)菌,提取重组质粒进行酶切及测序鉴定正确后,在IPTG诱导下原核表达IL-13R α2抗原肽,并利用镍柱进行纯化回收,SDS-PACE检测表达蛋白。结果:成功扩增出IL-13Rα2基因序列,大小为1142 bp,并表达纯化出IL-13Rα2抗原肽,大小为60 kD,于诱导第3 h表达量最高,以包涵体形式表达。结论:IL-13Rα2基因表达质粒能在体外成功构建,并能在IPTG诱导下成功表达及纯化得到IL-13Rα2抗原肽。

关键词：胶质瘤 IL-13Rα2 抗原肽表达质粒

抗原肽致敏白介素12基因修饰的树突状细胞免疫治疗转移性肺癌

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免疫学杂志 2003年第4期19卷 299-302页

作者：陈吉泉修清玉颜泽敏第二军医大学长征医院呼吸内科上海200003

目的　探讨肿瘤多肽致敏的白介素 12 (IL 12 )基因修饰的树突状细胞 (DC)对自发性肺转移癌的治疗作用。方法　小鼠足垫注射 3LLLewis肺癌细胞建立自发性肺转移癌模型 ,经骨髓来源的IL 12基因修饰、3LL特异抗原多肽Mut1体外致敏DC(DC IL ... 详细信息

目的　探讨肿瘤多肽致敏的白介素 12 (IL 12 )基因修饰的树突状细胞 (DC)对自发性肺转移癌的治疗作用。方法　小鼠足垫注射 3LLLewis肺癌细胞建立自发性肺转移癌模型 ,经骨髓来源的IL 12基因修饰、3LL特异抗原多肽Mut1体外致敏DC(DC IL 12 Mut1)皮下免疫 2次 ,观察荷瘤鼠肺脏质量、肺表面转移结节、存活期的变化及相应免疫指标等变化 ,实验分8组 ,组间差异行t检验 ,生存期行时序检验。结果　与对照病毒组 (DC LacZ Mut1)及未处理DC组相比 ,DC IL 12 Mut1组肺脏质量最轻 (P 抗原多肽致敏的IL

关键词：抗原肽白介素12 基因修饰树突状细胞免疫治疗转移性肺癌

抗原肽－MHC－TCR三元体一特异性免疫应答的分子基础

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中国免疫学杂志 1994年第3期10卷 191-192,F003页

作者：周光炎上海市免疫学研究所上海第三医科大学

抗原肽－ＭＨＣ－ＴＣＲ三元体一特异性免疫应答的分子基础周光炎（上海市免疫学研究所上海第三医科大学上海２０００２５）Ｔ淋巴细胞在特异性免疫应答中起关键作用。Ｔ细胞通常识别由抗原递呈细胞ＡＰＣ提交，并与ＭＨＣ分子相结合的... 详细信息

抗原肽－ＭＨＣ－ＴＣＲ三元体一特异性免疫应答的分子基础周光炎（上海市免疫学研究所上海第三医科大学上海２０００２５）Ｔ淋巴细胞在特异性免疫应答中起关键作用。Ｔ细胞通常识别由抗原递呈细胞ＡＰＣ提交，并与ＭＨＣ分子相结合的抗原片段层，因而在Ｔ细胞和ＭＣ之间...

关键词：抗原肽三元体免疫应答 T细胞

淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

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中华医学杂志 2005年第21期85卷 1476-1480页

作者：郭晓玲朱平朱霞刘静欧媛杜金伟北京大学第一医院血液内科郑州大学第三医院儿科

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的... 详细信息

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。

关键词：抗原肽 T细胞克隆 HLA-A*0201 人类白细胞抗原(HLA) 免疫球蛋白重链可变区逆转录-多聚酶链反应细胞毒性T淋巴细胞外周血单个核细胞酶联免疫吸附实验 CD8^+CTL 流式细胞仪检测主要组织相容性 CD4/CD8 ELISA检测 T细胞受体

负载抗原肽的树突状细胞增强腺病毒载体介导hTRP2诱发抗小鼠黑色素瘤免疫

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中华肿瘤杂志 2006年第9期28卷 658-661页

作者：谭晓华刘畅万永红北京军区总医院血液科 100700 加拿大麦克玛斯特大学病理分子医学系基因治疗中心

目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或D... 详细信息

目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或DC／SVYDFFVWL再免疫一次。用体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验和细胞内IFNγ染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFNγ的产生;或给免疫小鼠皮下接种B16．F10细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况。结果测定脾脏中6 h CTL杀伤率和产生IFNγ的CD8+T细胞比例,结果分别是:Ad hTRP2(初免)- Ad hTRP2(加强)组为68．40％±5．50％和0．67％±0．16％,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为28．50％±6．40％和0．22％±0．07％,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为98．90％±0．90％和1．05％±0．21％。荷瘤实验显示,小鼠接种1×106 B16．F10细胞后3个月,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠无一成活,Ad hTRP2(初免)-Ad hTRP2(加强)组只有40％的小鼠存活,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠100％存活。结论用DC／SVYDFFVWL加强免疫能显著地增强Ad hTRP2初次免疫的效果,表明Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)免疫是一种克服重复应用腺病毒并不能提高抗肿瘤免疫效应的有效方式。

关键词：腺病毒载体树突状细胞酪氨酸酶相关蛋白2 抗原肽初免-加强免疫方式