人重组LIGHT-Fc分子的真核表达及其抗肿瘤活性研究

作     者：黄钢 白云 姜曼 黎万玲 

作者机构：第三军医大学分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学免疫学教研室重庆400038 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2003年第19卷第5期

页      面：499-502页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：人 LIGHT LIGHT-Fc 信号肽 重叠延伸 蛋白A亲和层析 抗肿瘤 生物学活性 

摘      要：目的 :构建人LIGHT Fc基因的真核表达质粒 ,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT Fc融合蛋白。方法 :从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因 ,并导入克隆载体。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,用重叠延伸技术(SOE)引入CD137信号肽基因。将SOE产物与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,瞬时转染 2 93T细胞 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE检测其纯度与Mr,并以肿瘤细胞为靶细胞 ,检测其生物学活性。结果 :测序证实构建的LIGHT与LIGHT FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA和SDS PAGE证实LIGHT Fc融合蛋白的表达与纯度 ;MTT证明人LIGHT Fc蛋白对一些肿瘤细胞系具有生长抑制作用。结论 :获得了有抗肿瘤活性的纯化hLIGHT Fc融合蛋白 ,为探讨LIGHT在免疫自稳调节中的地位、结合相应受体后的动力学与信号转导机制 。