重组FLAG标签的融合表达纯化及亲和常数的测定

作     者：邹少林 丁先锋 郭江峰 ZOU Shaolin;DING Xianfeng;GUO Jiangfeng

作者机构：浙江理工大学生命科学学院杭州310018 

出 版 物：《科技通报》 (Bulletin of Science and Technology)

年 卷 期：2010年第26卷第3期

页      面：350-357页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：浙江省生物医学工程重中之重学科人才基金项目 

主　　题：FLAG 融合标签 蛋白纯化 亲和常数 

摘      要：构建了三种融合标签FLAG1(DYKDDDDK)、FLAG2(DYKDYKYK)和FLAG3(DYKGGGYK)的原核表达质粒pGEX-2t-His-NSH2-FLAG,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,表达并纯化重组蛋白GST-His-NSH2-FLAG。生物信息学分析表明FLAG1的亲水性和抗原性较强,FLAG2次之,FLAG3最弱。Western blotting分析表明单抗M2能够识别此三种FLAG融合蛋白。非竞争性酶免疫法测得FLAG1、FLAG2和FLAG3结合单抗M2的亲和常数分别为0.077μM,0.102μM和0.126μM。相关工作为在多肽芯片上应用FLAG标签进行蛋白质相互作用的检测奠定了一定的基础。