无血清分离昆明系小鼠胚胎干细胞

作     者：余树民 严兴荣 陈冬梅 王晗 窦忠英 YU Shu-min;YAN Xing-rong;CHEN Dong-mei;WANG Han;DOU Zhong-Ying

作者机构：西北农林科技大学动物科技学院国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2008年第28卷第3期

页      面：328-332页

核心收录：

学科分类：0907[农学-林学] 090705[农学-野生动植物保护与利用] 08[工学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 0836[工学-生物工程] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：国家“863”计划资助项目(2005AA21905) 教育部重大科技资助项目(03160) 陕西省重大科技专项资助项目(2006KZ05-G1) 

主　　题：昆明系小鼠 胚胎 胚胎干细胞(ESCs) 内细胞团(ICM) 

摘      要：以昆明系小鼠胚胎为研究材料,以丝裂霉素C处理的胎鼠成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEF）为饲养层,在胚胎干细胞（Embryonic stemcells,ESCs）培养液中添加血清替代物（Knockout serumreplacement,KSR）以替代胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）,并与添加FBS的培养液进行对比,研究了昆明系小鼠胚胎贴壁、ICM（Inner cell mass,ICM）集落形成以及ESCs分离的情况。结果表明,在添加KSR的培养液中,胚胎在培养3~5 d贴壁,胚胎贴壁率显著低于添加FBS的培养液;5~7 d形成ICM集落,集落未分化形态可维持2~3 d,培养10 d ICM集落仍可保持典型的未分化形态;ICM集落形成率和1代ESCs集落出现率与添加FBS的培养液相比差异不显著（P〉0.05）,但2~5代ESCs集落出现率显著高于添加FBS的培养液,其中有2株ESCs在添加KSR的培养液中传到7代;所分离细胞显示碱性磷酸酶染色强阳性,Oct-4、Nanog的免疫组化染色阳性,具有ESCs的特点。结论：在ESCs培养液中添加KSR比添加FBS更有利于维持ICM集落及ESCs的未分化状态。