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小鼠胚胎脊髓神经干细胞提取与传代培养:3种常用消化酶优劣的比较与分析

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6609-6615页

作者：罗丹葛志林侯永辉王万舜詹吉恒侯宇林定坤陈树东广州中医药大学第二附属医院广东省广州市510000 广东省中医药科学院广东省广州市510000 广州中医药大学广东省广州市510000

背景:在神经干细胞的研究及应用过程中,细胞的培养与传代是关键环节,直接影响到细胞的质量和实验结果。寻找一种最适宜的消化酶类,对维持胚胎小鼠脊髓神经干细胞的生物学特性并增强其传代效率,具有重要意义。目的:探讨胚胎小鼠脊髓神经... 详细信息

背景:在神经干细胞的研究及应用过程中,细胞的培养与传代是关键环节,直接影响到细胞的质量和实验结果。寻找一种最适宜的消化酶类,对维持胚胎小鼠脊髓神经干细胞的生物学特性并增强其传代效率,具有重要意义。目的:探讨胚胎小鼠脊髓神经干细胞传代最适合的消化酶。方法:显微解剖分离提取孕14 d C57BL/6胎鼠脊髓组织,用含有表皮生长因子、碱性成纤维生长因子及B27的DMEM/F12无血清培养基培养,待成球后进行Nestin与Sox2免疫荧光鉴定。神经干细胞传代培养过程中分别采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶以及TrypLE^(TM)Express酶消化结合吹打法制成单细胞悬液,观察细胞分散效果及成球情况,取第3代细胞进行碘化丙啶染色观察细胞死亡情况,通过计数细胞总数观察细胞增殖情况,通过免疫荧光染色、Western blot和RT-PCR检测Olig2、Tuj1、GFAP、NeuN蛋白和mRNA表达鉴定细胞分化情况。结果与结论:脊髓组织细胞培养72 h后可形成悬浮生长的神经球,5-7 d后即可传代。与胰蛋白酶、木瓜蛋白酶相比,TrypLE^(TM)Express酶结合吹打法进行传代的细胞分散率高,活性较好,分化为NeuN与Tuj1的阳性神经元细胞较多。此研究优化了神经干细胞的培养和传代过程,为进一步开展脊髓疾病的干细胞移植治疗研究奠定了基础。

关键词：神经干细胞 C57BL/6小鼠胚胎脊髓胰蛋白酶木瓜蛋白酶 TrypLE^(TM)Express酶工程化干细胞

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斑马鱼胚胎中受Nodal信号调控基因的鉴定

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生物化学与生物物理进展 2007年第6期34卷 595-603页

作者：孙智慧孟安明清华大学生物科学与技术系发育生物学实验室蛋白质科学教育部重点实验室北京100084

Nodal信号在脊椎动物胚胎发育的中内胚层诱导、左右不对称性的建立、神经外胚层沿前后轴线的分化等方面起着重要的作用.为鉴定受Nodal信号调控的基因,特别是那些转录因子基因,通过将来自squint过量表达、缺失Nodal信号的MZoep突变体或... 详细信息

Nodal信号在脊椎动物胚胎发育的中内胚层诱导、左右不对称性的建立、神经外胚层沿前后轴线的分化等方面起着重要的作用.为鉴定受Nodal信号调控的基因,特别是那些转录因子基因,通过将来自squint过量表达、缺失Nodal信号的MZoep突变体或野生型30%外包期胚胎的RNA与Affymetrix斑马鱼寡核苷酸芯片杂交.发现与野生型样本相比,在squint过量表达的样本中,265个转录本的表达显著增强(log2ratio>1),111个转录本的表达显著减弱(log2ratio1)转录本有1495个,表达显著减弱(log2ratio<-1)的有550个.squint过量表达使26个转录因子基因的表达增强,11个转录因子基因的表达减弱;另一方面,MZoep突变体中表达增强的转录因子基因为69个,表达减弱的转录因子基因为30个.这些结果为进一步研究Nodal信号的转导机理和生物学功能提供了有益的数据.

关键词：斑马鱼胚胎 Nodal 基因芯片转录因子

胸腺肽-β4在小鼠卵母细胞和早期胚胎中的表达与分布规律

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生物化学与生物物理进展 2009年第9期36卷 1193-1201页

作者：张岩李树峰杨彩荣郑可佳李宁严云勤东北农业大学动物细胞与发育生物学教研室哈尔滨150030

胸腺肽-β4(thymosin-β4,Tb4)是一种重要的G-actin遮蔽因子(G-actin sequestering factor),在细胞微丝活动中有着调节G-actin活性的作用.以往报道证实了Tb4在细胞中具有广泛的生理作用,但其在哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育等方... 详细信息

胸腺肽-β4(thymosin-β4,Tb4)是一种重要的G-actin遮蔽因子(G-actin sequestering factor),在细胞微丝活动中有着调节G-actin活性的作用.以往报道证实了Tb4在细胞中具有广泛的生理作用,但其在哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育等方面的作用,迄今还没有系统的研究报道.以昆明白小鼠卵巢、卵母细胞和早期胚胎作为实验材料,以免疫(荧光)组织化学和RT-PCR技术为主要研究方法,对Tb4的表达与分布进行了研究.结果显示,Tb4在相关发育过程中,存在差异性的表达和定位变化.结果表明,在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎的发育过程,Tb4能够通过表达与分布的变化对细胞微丝活动和细胞增殖活动进行调控,对小鼠卵母细胞成熟、早期胚胎发育以及胚胎着床过程有重要的作用.

关键词：胸腺肽-β4 小鼠卵母细胞胚胎微丝免疫荧光组织化学激光共聚焦扫描显微镜

双酚AF暴露对胚胎期和幼鱼期斑马鱼的毒性效应

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环境科学研究 2015年第8期28卷 1219-1226页

作者：杨洋陈亚文唐天乐唐文浩海南大学环境与植物保护学院海南海口570228 海南大学海口市环境毒理学重点实验室海南海口570228 海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571199

为明确不同发育阶段的斑马鱼对BPAF(双酚AF)暴露的易感性,采用暴露试验法初步研究了BPAF对胚胎期和幼鱼期斑马鱼的发育毒性.结果表明:1BPAF暴露可延缓胚胎期斑马鱼的发育和孵化,使其出现心包水肿、卵黄囊异常、心率下降、心脏搏动停止... 详细信息

为明确不同发育阶段的斑马鱼对BPAF(双酚AF)暴露的易感性,采用暴露试验法初步研究了BPAF对胚胎期和幼鱼期斑马鱼的发育毒性.结果表明:1BPAF暴露可延缓胚胎期斑马鱼的发育和孵化,使其出现心包水肿、卵黄囊异常、心率下降、心脏搏动停止等症状.2暴露96 h后,ρ(BPAF)为2.0、2.5、3.0 mg/L暴露组胚胎期斑马鱼的畸形率高达100%,暴露24 h致畸的EC50(半数效应浓度)为2.00 mg/L,暴露96 h的LC50(半数致死浓度)为1.84 mg/L.3暴露72 h后,对照组幼鱼期斑马鱼鱼鳔发育缺陷率为0;除ρ(BPAF)为1.0 mg/L暴露组外,其余BPAF暴露组幼鱼期斑马鱼鱼鳔发育缺陷率为100%.4随着暴露时间的延长以及中毒程度的加深,幼鱼期斑马鱼出现的中毒症状依次表现为心包水肿、卵黄囊水肿、背脊弯曲、心跳停止,暴露48和72 h时其心包水肿的EC50分别为1.76、1.56 mg/L,暴露96 h的LC50为1.77 mg/L.胚胎期和幼鱼期斑马鱼对BPAF暴露响应的差异分析显示,幼鱼期斑马鱼对BPAF暴露的反应更为敏感,幼鱼期斑马鱼的心包水肿症状可作为BPAF毒性响应的最佳指标之一.

关键词：双酚AF 斑马鱼胚胎幼鱼毒性效应

基于高光谱图像的鸡种蛋孵化早期胚胎性别鉴定

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农业工程学报 2016年第1期32卷 181-186页

作者：潘磊庆张伟于敏莉孙晔顾欣哲马龙李紫君胡鹏程屠康南京农业大学食品科技学院南京210095 南京晓庄学院食品科学学院南京211171 南京农业大学动物科技学院南京210095

为了对鸡种蛋孵化早期胚胎进行性别鉴定,构建了高光谱图像采集系统,在400~1 000 nm范围内获取94枚种蛋孵化0~12 d的高光谱透射图像。分别在胚胎的圆头、中间、尖头3个部位选择感兴趣区域（region of interest,ROI）,获取400~1 000 nm波... 详细信息

为了对鸡种蛋孵化早期胚胎进行性别鉴定,构建了高光谱图像采集系统,在400~1 000 nm范围内获取94枚种蛋孵化0~12 d的高光谱透射图像。分别在胚胎的圆头、中间、尖头3个部位选择感兴趣区域（region of interest,ROI）,获取400~1 000 nm波段的响应信号,构建了支持向量机（support vector machine,SVM）、偏最小二乘判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLSDA）和人工神经网络（artificial neural network,ANN）的鸡胚胎性别鉴定模型,并比较了不同孵化时间雌雄胚胎的鉴别准确率。试验结果表明,SVM模型、PLSDA模型和ANN模型均对孵化第10天种蛋中间部位检测效果最好。随后通过分析第10天种蛋中间部位光谱响应的差异,选取600~900 nm的光谱值构建胚胎性别鉴定模型,结果发现,3种模型的判别准确率均有上升,SVM模型和PLSDA模型预测集样本判别准确率均为75.00%,ANN模型预测集样本判别准确率达到82.86%。其中,ANN构建的种蛋孵化胚胎性别检测模型的整体效果优于SVM模型和PLSDA模型。结果表明高光谱图像技术在检测鸡种蛋孵化早期胚胎性别方面有一定效果,但种蛋蛋壳的个体差异会对鉴定准确率造成一定影响。

关键词：光谱分析图像处理无损检测高光谱图像鸡种蛋孵化早期胚胎性别鉴定

端粒酶催化亚基基因在小鼠胚胎发育早期的转录活性

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生物化学与生物物理进展 2005年第3期32卷 282-287页

作者：王宇姚慧安晓荣陈永福苟克勉中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100094

用RT-PCR引物分别扩增成年昆明(KM) 小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总RNA发现,端粒酶催化亚基基因tert在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到PMD 18-T载体后测序,结果与已知cDNA序列一致. PMSG/hCG超数排卵方法获得KM小鼠... 详细信息

用RT-PCR引物分别扩增成年昆明(KM) 小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总RNA发现,端粒酶催化亚基基因tert在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到PMD 18-T载体后测序,结果与已知cDNA序列一致. PMSG/hCG超数排卵方法获得KM小鼠成熟卵母细胞和CZB溶液体外培养的胚胎(KM ♀×KM♂),用酸性Tyrode蒺s溶液消化透明带后,采用巢式RT-PCR,同时分析tert基因和持家基因hprt的转录发现,对于单个样品来说, 全部卵母细胞(15 h-post hCG,10/10) 都存在hprt转录本,其中,只有40%(4/10) 还同时存在tert转录本. 原核形成初期(20 h-post hCG,6/6) 和原核晚期(30 h post-hCG,8/8) 的受精卵,以及发育至2-C早期的胚胎(35 h-post hCG,7/7) 都不转录tert基因,只有hprtmRNA存在;2-C晚期(50 h-post hCG)时,两个基因同时转录(4/8)和一个基因单独转录(4/8)的胚胎各占50%;从4-C阶段(65 h-post hCG,4/4)开始,包括8-C阶段(75 h-post hCG,4/4),桑椹胚阶段(93 h-post hCG,4/4),直至囊胚阶段(118 h-post hCG,4/4),所有的胚胎都同时转录tert和hprt基因,而且转录水平明显升高. 以20枚胚胎量为模板进行RT-PCR发现,原核早期,原核晚期的胚胎中仍然没有tert基因转录,只有hprtmRNA,但是,在2-C早期胚胎中同时检测到了hprt和tert两种mRNA. ?

关键词：小鼠卵母细胞胚胎 tert基因 hprt基因端粒酶 RT-PCR

微塑料对斑马鱼胚胎孵化影响及其在幼鱼肠道中的积累

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环境科学 2021年第1期42卷 485-491页

作者：赵佳饶本强郭秀梅高进勇信阳学院教育学院信阳464000 信阳师范学院生命科学学院信阳464000 信阳学院理工学院信阳464000

微塑料在环境中的广泛存在引起了研究者对其潜在的生物影响的关注.为评价微塑料对水生生物的影响,本文以模式生物斑马鱼胚胎及其幼鱼为研究对象,探究了两种粒径不同的微塑料:粒径0.5μm的红色荧光标记聚苯乙烯微塑料(0.5RFPM)和粒径10μ... 详细信息

微塑料在环境中的广泛存在引起了研究者对其潜在的生物影响的关注.为评价微塑料对水生生物的影响,本文以模式生物斑马鱼胚胎及其幼鱼为研究对象,探究了两种粒径不同的微塑料:粒径0.5μm的红色荧光标记聚苯乙烯微塑料(0.5RFPM)和粒径10μm的绿色荧光标记聚苯乙烯微塑料(10GF-PM)对斑马鱼胚胎发育的影响及其在出生后5 d的斑马鱼幼鱼肠道中的积累.结果表明,10GF-PM对出生后3 d胚胎孵化没有影响,0.5RF-PM在500 mg·L^(-1)时对胚胎孵化抑制率达37%;10GF-PM溶液浓度为10、100、200和500 mg·L^(-1)时,出生后5 d幼鱼平均存活率分别为80%、54%、44%和41%;对应浓度0.5RF-PM暴露溶液中,幼鱼平均存活率分别为62%、37%、25%和12%.暴露在10、100和500 mg·L^(-1)的10GF-PM溶液中0.5 h,幼鱼肠胃道中微塑料荧光值分别是0.06、0.53和1.84,对应浓度0.5RF-PM暴露溶液中,荧光值分别是0.63、2.32和3.45.将暴露的幼鱼转移至清水中,1 h内可观察到微塑料通过肠道排出体外,持续放置24 h后,对应GF-PM暴露幼鱼肠道内微塑料荧光值分别是0.03、0.08和0.56,对应RF-PM暴露幼鱼肠道内微塑料荧光值分别是0.06、0.41和1.56.微塑料对斑马鱼的影响与浓度和粒径有关:浓度越高,胚胎孵化率和幼鱼成活率越低;粒径越小,越容易在肠胃道内积累.

关键词：微塑料斑马鱼胚胎幼鱼肠道

鲫鱼(Carassius auratus)卵和胚胎中母源性免疫球蛋白的定位

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中山大学学报（自然科学版） 2001年第2期40卷 82-85页

作者：李大疆钟明超林浩然中山大学水生经济动物研究所广东广州510275

自鲫鱼血清中沉淀出免疫球蛋白 (Ig)并层析纯化 .纯化后的Ig加福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂免疫大白兔制得特异抗血清 .免疫组化研究显示母源性Ig最初是在Ⅳ时相早期卵中出现 .在卵子的发育过程中 ,Ig遍布整个卵子并由卵膜至卵中心逐... 详细信息

自鲫鱼血清中沉淀出免疫球蛋白 (Ig)并层析纯化 .纯化后的Ig加福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂免疫大白兔制得特异抗血清 .免疫组化研究显示母源性Ig最初是在Ⅳ时相早期卵中出现 .在卵子的发育过程中 ,Ig遍布整个卵子并由卵膜至卵中心逐渐减少 ,其中卵膜内壁Ig最多 .在心跳期前的胚胎发育过程中 ,母源性Ig存在于卵膜内壁、胚胎和卵黄中 ,至尾鳍形成期完全消失 ;首先是胚胎和卵黄中的Ig消失(心跳期 ) ,然后是卵膜内壁的IgM消失 (尾鳍形成期 ) .在胚胎发育过程中 ,Ig亦遍布于卵黄之中 ;其中 ,卵膜内壁含Ig最多 ;在胚胎和卵黄中无Ig集中的现象 .

关键词：鲫鱼卵胚胎免疫球蛋白免疫系统抗血清免疫组织化学

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印迹基因及其对胚胎发育的调控

生物化学与生物物理进展 1999年第1期26卷 19-22页

作者：李宏军郭应禄张志文北京医科大学第一医院泌尿外科北京医科大学生理学系

某个基因位点呈单等位基因表达，且通过某种基因修饰作用来特异地抑制另一等位基因的表达，将这一基因称为印迹基因，它是等位基因排斥作用的一种特殊形式．多数印迹基因与胚胎发育有关，可以调节胚胎的生长、发育及新生儿的生长，印迹... 详细信息

某个基因位点呈单等位基因表达，且通过某种基因修饰作用来特异地抑制另一等位基因的表达，将这一基因称为印迹基因，它是等位基因排斥作用的一种特殊形式．多数印迹基因与胚胎发育有关，可以调节胚胎的生长、发育及新生儿的生长，印迹功能的紊乱可以导致多种发育异常及死胎．印迹基因的形成、特异识别及印迹性表达缺陷的机制还不清楚．

关键词：印迹基因胚胎生长发育调节