人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定

作     者：张兴梅 石玉生 刘忠英 ZHANG Xing-mei;SHI Yu-sheng;LIU Zhong-ying

作者机构：南方医科大学基础医学院神经生物教研室广东广州510515 南方医科大学南方医院放疗科广东广州510515 南方医科大学基础医学院组织和胚胎学教研室广东广州510515 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2008年第28卷第2期

页      面：151-153页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30500608)~~ 

主　　题：表皮生长因子受体 Ⅲ型突变体 胞外区 原核表达 融合蛋白 

摘      要：目的构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定。方法应用PCR方法扩增EGFRvⅢ ECD片段,将其T-A克隆和测序,再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达。结果测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在*** BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-vⅢECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上。Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究。